Aislamiento y purificacion de amastigotes de Leishmania braziliensis: su aplicacion al estudio comparativo de la superficie cecular de amastigotes y promastigotes de la cepa NR. / Isolation and purification of Leishmania braziliensis amastigotoes: its use in the comparative study of cellular surface of amastigotes and promastigotes of the NR strain

RESUMEN

Se desciben dos metodos rapidos y sencillos para el aislamiento y purificacion, con alto rendimiento, de amastigotes de Leishmania braziliensis a partir de lesiones cutaneas (granulomas) de hamster, los mismos se basan en homogenizacion controlada del tejido, centrifugacion diferencial y purificacion final en gradientes discontinuos de sacarosa (metodo A) o gradientes continuos autoformativos de Percoll (metodo B). Los amastigotes aislados son practicamente puros (> igual 99%), 90, 95% viables, altamente infectivos para el hamster y capaces de diferenicarse in vitro a promastigotes proliferativos a 28o.C El rendimiento alcanza valores entre 0,1 y 10 elevado a 9 amastigotes por gramo de tejido procesado. Las propiedades superficiales de promastigotes de cultivo y amastigotes aislados por el metodo A descrito arriba fueron comparadas usando como criterio la aglutinacion inducida por las lectinas concanavalina A y aglutinina de Ricino. Aunque la aglutinacion inducida por la aglutinina de Ricino es similar en ambas formas del parasito, hay una marcada diferencia en la aglutinabilidad por conacavalina A, la cual es muy alta en la forma promastigote y practicamente inexistente en el amastigote, a concentraciones < igual 50 ug/ml. Los resultados sugieren importantes diferencias en la composicion superficial de las dos formas del organismo, que podrian relacionarse con las diferencias en la infectividad y capacidad de supervivencia en el hospedero de las mismas