Isolamento e caracterizaçäo de peptídeos derivados do digesto pancreático de caseína e sua utilizaçäo na produçäo da toxina tetanica / Isolation and characterization of derivate peptides from pancreatic digest of casein and its utilization in tetanus toxin production

RESUMO

Foram purificados e isolados 13 peptídeos presentes no digesto pancreático de caseína (DPC). Os peptídeos 6.2.1; 7.4.2; 8.2.1; 8.3.1; 8.3.2 e 8.4.2 foram sequenciados peptídeo 6.2.1 Tyr-Val-Pro-Met peptídeo 7.4.2 Asp-Met-Pro-Ile; peptídeo 8.2.1 Val-Leu-Pro-Val-Pro-Gln; peptídeo 8.3.1 Val-Ala-Pro-Pho-Pro-Glu-Val-Phe; 8.4.2 Glu-Met-Pro-Phe-Pro-Lys. O peptídeo 8.3.2 teve sua sequência igual ao 8.3.1. Os peptídeos 6.1.1 Ile-Pro-Ile-Gln-Tyr-Val, 7.2.1 Val-Leu-Gly-Pro-Val, 7.4.1 Ala-Val-Pro-Tyr-Pro-Glx e 8.2.3 Leu-Val-Tyr-Pro-Phe-Pro, foram deduzidos de acordo com a análise de aminoácidos e análise de homologia da composiçäo da caseína bovina, descrito na literatura. Porem os peptídeos 7.5.1; 8.2.2 e 8.2.4 näo foi possível a sua deduçäo. Durante a fermentaçäo foi realizada análise do consumo de aminoácidos e glicose pelo Clostridium tetani. Os resultados demonstraram que a bactéria tem preferencia por alguns aminoácidos como His, Ser, Tht, ASP, Asn e Gln que foram consumidos totalmente. Outros aminoácidos livres como Pro, Ala e GLY tiveram um aumento de 1077 por cento, 164 por cento e 257 por cento respectivamente. A análise de aminoácidos das amostras coletadas e a fermentaçäo e comparada com a composiçäo de aminoácidos do DPO mostrou que a Pro, Ala e Gly livres, säo produtos da hidrólise total dos fragmentos de caseína pela bactéria. Na tentativa de determinar a concentraçäo de toxina tetânica secretada pela bactéria do meio de cultura, um substrato derivado da sequencia da sinaptobrevina foi desenvolvido. Esse substrato fluorescente com apagamento intramolecular foi hidrolisado na ligaçäo Glu-Thr com km de 1,2 micrometro Vmax de 0,96 micromol/min/mg.