Metodología preparativa y analitica para estandarizar y validar un sistema ELISA para cuantificar IgG de ratón / Preparative and analytical methodology to standardize and validate an ELISA system to quantify mouse's IgG

RESUMEN

Se purificó IgG de ratón por precipitación salina, seguido de una cromatografía de intercambio iónico, con el objetivo de desarrollar un método analítico que permitiera cuantificar anticuerpos monoclonales de origen murino. El producto fue utilizado para producir un anticuerpo policlonal en carnero. Se siguió un esquema de inmunización de varios meses con la utilización de adyuvantes, completo e incompleto, de Freund para lograr anticuerpos de alta afinidad. Se purificaron los lotes de antisueros seleccionados por cromatografía de inmunoafinidad mediante una matriz de IgG de ratón-Sepharose CL-4B. Los anticuerpos anti-IgG de ratón purificados fueron conjugados con peroxidasa de rábano picante y además, utilizados como recubrimiento. Se estandarizó un método ELISA tipo sandwich que barre un rango dinámico de 31,25-500 ng/mL. Se estudió la exactitud mediante la evaluación de la linealidad, el paralelismo y la comparación con un método de referencia y la precisión, según la repetibilidad y la reproducibilidad. Se concluyó que el sistema estandarizado cumple con los requisitos analíticos para cuantificar IgG de ratón