Evidencias de la presencia de una actividad tipo-quimotripsina en el espermatozoide humano y su rol en la reacción acrosómica / Evidence of the quimiotrypsin activity in the human spermatozoid and its role in the acrosomic reaction

RESUMEN

Se evaluó el efecto de inhibidores de la quimotripsina sobre la reacción acrosómica del espermatozoide humano estimulada por la zona pelúcida o fluido folicular humano. Espermatozoides mótiles, seleccionados por un gradiente de Percol, fueron incubadas en una concentración de 1x 10 células/ml, a 37 grados centigrados, y 5 por ciento de CO2. Después de 4.5 hrs. Se añadió el inhibidor de quimotripsina TPCK (N- Tosyl-L-Phenylalanine-Chloromethyl Ketone) o el sustrato ATEE (N-Acetyl-L-Tyrosine Ethyl Ester) por 30 minutos. Luego, se añadieron cuatro ovocitos humanos y se determinó el porcentaje de reacción acrosómica sobre la zona pelúcida. El TPCK y el ATEE inhibieron la reacción acrosómica producida por la zona pelúcida. Los inhibidores de quimotripsina TPCK y quimostatina y los sustratos para quimotripsina ATEE, BTEE (N-Benzoyl-Tyrosine-Ethyl Esther), Succinyl-Ala-Ala-Phe-7-Amido-4 Methyl-Coumarin (Suc-Ala-Ala-Phe-AMC), y Succynil-Leu-Leu-Val-Try-7-Amido-4 Methyl-Coumarin (Suc-Leu-leu-Val-Tyr-AMC) inhibieron la reacción acrosómica inducida por el fluido folicular humano. Los extractos espermáticos mostraron una actividad hidrolítica hacia los sustratos Suc-Ala-Ala-Phe-AMC y Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC. Esta actividad enzimática fue anulada por el TPCK y la quimostatina, en ausencia de Ca2+ y no fue modificada por la 1,10 fenantrolina. Además, esta actividad estuvo presente en el sobrenadante después de que la reacción acrosómica fue inducida por el ionóforo de calcio y en espermatozoides epidídimales recuperados de la región caudal. Observaciones con el microscopio electrónico indicaron que los inhibidores impidieron los eventos de membrana de la reacción acrosómica. Estos datos sugieren una asociación entre el espermatozoide humano y una actividad tipo quimotripsina con un posible rol en la reacción acrosómica