Óxido nítrico sintase e proteínas quinase A como alvos de derivados amidínicos anti-Leishmania / Nitric oxide synthase and protein kinase A as the white of the amidínicos derivatives anti-Leishmania

RESUMO

Há muito tempo o tratamento das Leishmanioses tem feito uso de quimioterápicos utilizados em altas doses diárias que provocam diversas reações de toxicidade e o aparecimento de formas resistentes de Leishmania; tais fatores ressaltam a necessidade de estudos de drogas alternativas que possam permitir o desenvolvimento futuro de inibidores anti-leishmaniais. A abordagem moderna do desenvolvimento racional de drogas baseia-se na identificação de vias metabólicas indispensáveis à sobrevivência do microrganismo; desta forma, após a seleção de alvos biológicos, o objetivo passa a ser a caracterização detalhada de componentes de vias metabólicas envolvidas, e assim, enzimas-chave podem ser exploradas no desenvolvimento de inibidores de reações enzimáticas, sem afetar a célula hospedeira. Neste trabalho, duas importantes vias de sinalização foram avaliadas como alvos da quimioterapia experimental anti-Leishmania amazonensis utilizando uma N, NÆ-difenilbenzamidina metoxilada (metoxi-amidina) a) via do óxido nítrico (NO.) - aqui caracterizada pela detecção de nitrito em sobrenadante de culturas de promastigotas e amastigotas axênicas, imunofluorescência, cromatografia de afinidade, eletroforese de proteína, atividade de óxido nítrico sintase e inibição enzimática; e b) via da proteína quinase A (PKA), cuja atividade foi previamente caracterizada em Leishmania amazonensis e citada na literatura como participante na fosforilação da óxido nítrico sintase. Em comparação à droga de referência (Isetionato de Pentamidina), o derivado metoxilado diminuiu significativamente a produção de NO. e a atividade de PKA de promastigotas e amastigotas axênicas. Os resultados obtidos apontam a importância do NO. Como molécula sinalizadora na interação parasita-hospedeiro, e sua rota de biossíntese merece grande consideração em estudos da ação seletiva de quimioterápicos anti-Leishmania em doses toleradas pelostecidos do hospedeiro.