Development of a transformation system for Penicillium brevicompactum based on the Fusarium oxysporum nitrate reductase gene

RESUMO

Penicillium brevicompactum é um fungo filamentoso que apresenta um potencial para a aplicacão industrial devido a sua eficiente producão de enzimas do complexo pectinolítico. Neste trabalho foi desenvolvido um sistema de transformacão heterólogo para P. brevicompactum baseado na complementacão de um mutante nitrato redutase. Mutantes nitrato redutase foram obtidos pela resistência ao clorato de sódio em uma taxa de 23,24per center. O mutante denominado 4457-18X foi escolhido para os experimentos de transformacão com o vetor pNH24, que contém o gene da nitrato redutase de Fusarium oxysporum. Uma freqüência de cerca de 3 transformantes/mg de DNA foi obtida utilizando-se o vetor pNH24 na forma circular e um aumento de cerca de 10 vezes nessa freqüência foi alcancado com a utilizacão desse vetor linearizado com a enzima de restricão Xba I. A análise dos transformantes pela técnica de hibridizacão revelou uma tendência do vetor linearizado diminuir o número de integracões em relacão ao vetor circular. A integracão foi aleatória e estável nos transformantes analisados. O estabelecimento de um sistema de transformacão para P. brevicompactum é essencial para a manipulacão genética desse microrganismo.