Identificación de genes de Mycobacterium tuberculosis que se expresan bajo condiciones de estrés anaeróbico / Identification of Mycobacterium tuberculosis gen differentially expresed during anaerobic stress conditions

RESUMEN

Objetivo: identificar genes de M. tuberculosis que se inducen bajo condiciones de limitación de oxigeno para estudiar su posterior efecto sobre la viabilidad del patógeno. Materiales y métodos: se crecieron cultivos de la cepa no patógena M. smegmatis mc²155 en cajas de microcultivo bajo condiciones de estrés anaeróbico. Se construyó una biblioteca genómica de M. tuberculosis H37Rv en el plasmado pGFP, la cual fue introducida dentro de M. smegmatis. A partir de observación de las células de M. smegmatis recombinantes bajo luz UV se identificaron clones que indujeran la expresión del gen reportero bajo condiciones de limitación de oxígeno. Los plásmidos recombinantes de estos clones fueron aislados y los insertos secuenciados. Las secuencias obtenidas fueron analizadas comparándolas con el genoma completo de M. tuberculosis. Resultados: Se estandarizaron las condiciones in vitro para realizar estudios por estrés anaeróbico usando la micobacteria M. smegmatis. El tamizaje de la genoteca de M. tuberculosis dentro de M. smegmatis llevó a la identificación de 3 posibles fragmentos genómicos que inducen la expresión de gfp en condiciones de estrés anaeróbico. La secuencia de estos insertos reveló que contenían posibles secuencias reguladoras, dos de ellas corriente arriba de los genes para las proteínas hipotéticas Rv2603 y Rv3267 de M. tuberculosis y la otra para un marco abierto de lectura no identificado. Conclusiones: Utilizando librerías genómicas y una micobacteria no patógena como M. smegmatis es posible identificar genes de M. tuberculosis posiblemente involucrados en resistencia a condiciones de estrés