Estandarización y aplicación de la técnica de PCR – anidado para la detección de Mycoplasma hyopneumoniae / Standardization and application of the PCR – nested technique for the detection of Mycoplasma hyopneumoniae

RESUMEN

El Mycoplasma hyopneumoniae es el agente causal de la Neumonía enzoótica porcina, una de las enfermedades más importantes en la industria porcina. En la actualidad, el proceso de diagnóstico ante-mortem es una de las principales dificultades, dadas la poca sensibilidad y especificidad de las técnicas que se utilizan. El propósito de esta investigación fue estandarizarla técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) anidada para la detección de Mycoplasma hyopneumoniae, utilizando diferentes métodos de extracción del ADN, tanto comerciales como convencionales. Para determinar la sensibilidad de la técnica se realizaron diluciones seriadas al cultivo de Mycoplasma hyopneumoniae, cepa J, mantenida en medioFriis. También se evaluaron algunas modificaciones hechas a la mezcla de la reacción dePCR tradicional reportadas en la literatura y, una vez ajustada, la técnica fue aplicada enmuestras clínicas como hisopados nasales y lavados traqueobronquiales. Los mejores resultados fueron obtenidos cuando el ADN se extrajo de la bacteria por calor yse trató con proteinasa K para luego ser utilizado en una reacción de PCR - anidado que nocontenía estabilizadores de la Taq-polimerasa, como el glicerol o la seroalbúmina bovina.Bajo estas condiciones, se logró detectar M. hyopneumoniae hasta la dilución de 10-5 de uncultivo puro de la cepa J de referencia y también a partir de algunas muestras clínicas...