Detección de contaminación por Mollicutes en cultivos celulares mediante amplificación del gen 16S rARN / Detection of mollicutes contamination in cell cultyures by 16S rRNA amplification

RESUMEN

La contaminacion de los cultivos celulares por Mollicutes es un hecho frecuente en los laboratorios, reportándose hasta un 80% de cultivos contaminados, lo que resulta en ensayos experimentales poco confiables y en productos biológicos poco seguros. Los objetivos del presente estudio fueron estimar la frecuencia de micoplasmas como contaminantes de cultivos celulares y analizar la eficiencia de un ensayo de PCR que emplea como ADN blanco al gen 16S rARN de los Mollicutes. Se estudiaron 39 cultivos celulares primarios, recibidos para análisis de contaminación, entre julio y diciembre de 2005. Se detectaron micoplasmas en 18/39 (46,2%) cultivos de lineas celulares, mientras que no se detectaron micoplasmas en los cultivos celulares primarios. El análisis mediante Hpall del espacio intergénico 16S- 23S rARN de 6 cultivos positivos determinó dos patrones de restrición. La secuenciación del ADN de dos amplicones identifico a Mycoplasma hyorhinis y a Mycoplasma salivarium como micoplasmas contaminantes. La sensibilidad analítica de la PCR, determinada a partir de diluciones de un cultivo de Mycoplasma hominis fue 0,01 u.c.c./mL (unidades cambiadoras de color por mL), mientras que su especificidad analitica fue 100%. Los resultados de este estudio confirman la importancia de los micoplasmas como contaminantes de cultivos celulares y sugieren que la PCR dirigida al gen 16S rARN es un procedimiento útil para el diagnótico de estos microorganismos.