Evaluación de la coloración diferencial de fluorescencia modificada en Pseudomonas spp. aisladas de suelo / Evaluation of the modified flourescence staining differential on Pseudomonas spp. isolated from soil

RESUMEN

Se evaluó la coloración diferencial de fluorescencia modificada en Pseudomonas spp. aisladas de suelos de cultivos agrícolas del estado Sucre, a fin de observar eventos microscópicos relacionados con el ciclo celular. Cada especie de Pseudomonas identificada bioquímicamente se sembró en caldos incubados a temperatura ambiente, aerobiosis, durante 15, 20, 30 y 45 minutos, y 1, 24, 48 y 72 horas; luego, se elaboraron y colorearon los extendidos. En las 24 cepas de Pseudomonas identificadas, P. mendocina (41,67 por ciento), P. aeruginosa (37,50 por ciento) y P. putida (20,83 por ciento), se observaron variaciones de tinción en los diferentes tiempos de incubación como verde, amarilla y anaranjada, fluorescentes y de baja fluorescencia. La coloración emplea naranja de acridina que se intercala al ADN, provocando fluorescencia verde, e interactúa con el ARN provocando fluorescencia anaranjada; el decolorante remueve el naranja de acridina no unido al material genético y la fluoresceína de sodio produce color amarillo en bacterias que retienen suficiente cantidad de naranja de acridina. Las variaciones de tinción citoplasmática en Pseudomonas spp., están asociadas a la cantidad de ARN y ADN presente en la célula de acuerdo a la fase de su ciclo celular.

ABSTRACT

The modified fluorescence staining differential was evaluated using Pseudomonas spp. isolated from cultivated agricultural soils in the State of Sucre, in order to observe microscopic events related to the cellular cycle. Each species of biochemically identified Pseudomonas was inoculated into a broth and incubated at room temperature, aerobiosis, for 15, 20, 30 and 45 minutes and 1, 24, 48 and 72 hours; then, slides were made and stained. For the 24 identified strains of Pseudomonas, P. mendocina (41.67 percent), P. aeruginosa (37.50 percent) and P. putida (20.83 percent), staining variations such as green, yellow and orange, fluorescent and low fluorescence were observed for the different incubation times. The stain uses acridine orange that interacts with DNA by intercalation, causing green fluorescence; it interacts with RNA by electrostatic attraction causing orange fluorescence; the alcohol-acetone decolorant removes the acridine orange not united with the genetic material and sodium fluorescein produces a yellow color in bacteria that retain a sufficient amount of acridine orange. Cytoplasmatic staining variations in Pseudomonas spp., are associated with the amount of RNA and DNA present in the cells according to the phase of their cellular cycle.