Diagnóstico molecular da doença de Von Hippel-Lindau (VHL) em famílias brasileiras: estudo ampliado / Molecular diagnosis of the disease of Von Hippel-Lindau (VHL) in Brazilian families: study extended

RESUMO

A doença de von Hippel-Lindau (VHL) é uma doença hereditária multissistêmica, causada por mutação no gene VHL que predispõe o portador a manifestações benignas e malignas em diversos órgãos. O início dos sintomas pode ocorrer a partir dos primeiros anos de vida e inclui entre outros, angioma de retina, hemangioblastoma de sistema nervoso central (SNC), feocromocitoma, carcinoma renal do tipo células claras e cistos múltiplos renais, pancreáticos, hepáticos e de epidídimo. O diagnóstico clínico baseia-se em critérios que consideram a história familial e a apresentação clínica das lesões. Muitas vezes o diagnóstico é dificultado ou retardado até que estes critérios sejam preenchidos. O aconselhamento genético e avanços dos métodos de diagnóstico e de tratamento vêm mudando o curso desta enfermidade com a diminuição da morbidade e da mortalidade, contribuindo para a melhoria da qualidade de vida das famílias afetadas por esse mal e para o entendimento da doença. O diagnóstico molecular da doença baseia-se na aplicação de técnicas de biologia molecular que visam a detecção de mutações germinativas no gene VHL. O teste genético em pacientes com VHL permite avaliar a amplitude do fenótipo da doença baseado no estudo de outras famílias com a mesma mutação... Neste estudo, foram analisadas 100 indivíduos, sendo 83 indivíduos pertencentes a 20 famílias com diagnóstico de VHL; sete indivíduos pertencentes a duas famílias em que VHL era um diagnóstico diferencial; oito pacientes com tumores relacionados a VHL aparentemente esporádicos, além de dois familiares de uma paciente com hemangioblastoma aparentemente esporádico na qual foi identificada mutação germinativa no gene VHL. A taxa de 100% de detecção de mutação foi alcançada no estudo das 20 famílias com VHL através da combinação das técnicas de seqüenciamento direto e de Southern-blot quantitativo...(AU)

ABSTRACT

von Hippei-Lindau (VHL) disease [MIN 193300] is a heritable monogenetic disorder transmitted in a autosomal dominant pattern that predisposes affected individuais to the development to many typical lesions, including retina! angiomas, hemangioblastomas of the central nervous system, multiple cysts of the kidneys and pancreas, pheochromocytoma (PHE), renal cell carcinoma (RCC), and pancreatic tumors. The molecular basis of the disease is the presence of germline mutations in the VHL tumor suppressor gene. A total of 17 consecutive families with VHL (15 from Brazil, one from Portugal, and one from Equator) and three Brazilian VHL patients without family history were included in this study. Genetic counseling with signed informed consent was offered to ali participants. The mutation detection strategy consisted in direct sequencing of the coding regions of the VHL gene and quantitative Southern-blotting. We identify germline mutations in ali probands, giving rise to a 1 00°/o mutation detection rate. These consisted in 16-point mutations (9 missense, 3 frameshift, 1 in-frame deletion, 2 splice defect, 1 non-sense), 3 partia! deletions and 1 complete deletion of the VHL gene. As observed in other studies, mutations in the codon 167 confer a high risk for PHE and RCC, and mutations that predicted a truncated protein were related to VHL type 1. Twelve families (60°/o) could be characterized as having a high risk to renal carcinoma based on the family occurrence or characteristics of the mutations. Three out four families with large deletions had a high incidence of HB of the SNC. Also, we observed a tendency of the germline point mutations to concentrate among exons 1 and 2 of the VHL gene, including boundaries (87.5°/o). In addition, eight novel VHL gene mutations and two polymorphisms (one novel) are described. We concluded that the combination of direct sequencing and quantitative Southern-blotting represented a good strategy for germline mutation detection in the VHL gene and can be considered the gold standard when 1 00°/o mutation detection is needed. This preliminary study suggests that VHL families in Brazil, which are mostly of Portuguese origin, may have unique features in respect to VHL mutations and risk of malignancies, and this may be considered in the approach of genetic counseling and screening for patients of Portuguese descendents (AU)