Avaliação de metodologias moleculares para detecção e quantificação do vírus da hepatite C / Evaluation of molecular methodologies for detection and quantification of hepatitis C virus

RESUMO

O vírus da Hepatite C (Hepatits C Vírus ou HCV) apresenta genoma constituído de RNA de fita simples, polaridade positiva, e pertence ao gênero Hepacivirus dentro da família Flaviviridade. O diagnóstico da infecção pelo HCV é feito por meio de testes sorológicos e moleculares. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de metodologias para detecção e quantificação do RNA do HCV em dois grupos de pacientes virgens de tratamento antiviral e durante o curso da infecção aguda. Amostras de soro obtidas de 43 indivíduos reativos para anti-HCV e de um grupo de seis indivíduos com amostras seriadas coletadas durante o curso da infecção foram submentidas às técnicas qualitativas (RT-nested PCR, PCR-ELISA e TMA) e quantitativas (PCR-ELISA Quantitativa e DNA ramificado ou bDNA) de detcção do RNA do HCV, e genotipagem por análise do polimorfismo do tamanho dos fragmentos de restrição (Restriction Fragment Length Polymorphism ou RFLP). A técnica TMA apresentou a maior taxa (98por cento) de detecção do RNA do HCV e a técnica bDNA apresentou a menor taxa (88por cento) de detcção do RNA viral. Ao compararmos os resultados obtidos entre as técnicas qualitativas (RT-nested PCR vs PCR-ELISA) e entre os testes quantitativos (PCR-ELISA Quantitativas vs bDNA) observamos boa concordância. Na PCR-ELISA Quantitativa (COBAS AMPLICOR HCV Monitor Test v2.0) a não realização de diluição das amostras de soro com carga viral acima de 700.000 UI/mL pode ter subestimado os valores de carga viral. De acordo com a avaliação de minimização dos custos, os testes qualitativos de menor e maior custo foram RT-nested PCR e TMA, respectivamente, e os testes quantitativos de menor e maior custo forma COBAS AMPLICOR HCV Monitor Test v2.0 e bDNA, respectivamente. O teste TMA foi o mais sensível dentre os três ensaios qualitativos analisados. Em relação ao desempenho dos testes quantitativos nas amostras seriadas, observamos que a carga viral foi melhor determinada pelo...