Evaluation of PCR and multiplex PCR in relation to nested PCR for diagnosing Theileria equi / Avaliação da PCR e PCR multiplex com relação a nested PCR no diagnóstico de Theileria equi

ABSTRACT

Conventional PCR (PCRTeq) for diagnosing Theileria equi and multiplex PCR (M/PCRTeq-Bc) for diagnosing T. equi and Babesia caballi were comparatively evaluated with nested PCR (N/PCR-Teq) for diagnosing equine piroplasmosis. In DNA sensitivity determinations, in multiple dilutions of equine blood that had tested positive for T. equi, PCR-Teq and N/PCR-Teq detected hemoparasite DNA in the larger dilutions (1128), but did not differ significantly from the M/PCRTeq-Bc (164). In analyses on equine serum tested by ELISA, there was high agreement between this serological test and PCR-Teq (k = 0.780) and moderate agreement with N/PCR-Teq (k = 0.562) and M/PCRTeq-Bc (k = 0.488). PCR-Teq found a higher frequency of T. equi both in extensively and intensively reared horses, but this was not significant in relation to N/PCR-Teq (P>0.05), and both PCRs indicated that there was an endemic situation regarding T. equi in the population of horses of this sample. PCR-Teq was only significantly different from M/PCR-Teq-Bc (P<0.05). PCR-Teq presented high sensitivity and specificity, comparable to N/PCR-Teq, but with the advantage of higher speed in obtaining results and lower costs and risks of laboratory contamination. This accredits PCR-Teq for epidemiological studies and for determinations on affected horses.

RESUMO

Uma PCR convencional (PCRTeq) para diagnóstico de Theileria equi e PCR multiplex (M/PCRTeq-Bc) para diagnóstico T. equi e Babesia caballi foram avaliadas comparativamente a nested PCR (N/PCR-Teq) no diagnóstico de piroplasmose equina. Na determinação da sensibilidade com DNA em diluições múltiplas de sangue de equino positivo para T. equi, as PCR-Teq e N/PCR-Teq detectaram DNA do hemoparasito nas diluições maiores (1128), mas não diferiu significativamente da M/PCRTeq-Bc (164). Na análise com soros de equinos testados por ELISA houve uma concordância elevada entre esse teste sorológico e a PCR-Teq (k =0,780) e moderada com N/PCR-Teq (k = 0.562) e M/PCRTeq-Bc (k = 0.488). A PCR-Teq determinou freqüência maior de T. equi tanto nos equinos de criação extensiva como na intensiva, entretanto essa não foi significativa com relação N/PCR-Teq (P>0.05), e ambas PCRs indicaram que há uma situação endêmica para T. equi na população de equinos que constaram da amostragem. A PCR-Teq diferiu significativamente apenas para a M/PCRTeq-Bc (P<0.05). A PCR-Teq apresentou alta sensibilidade e especificidade comparável a N/PCR-Teq, mas com a vantagem de maior rapidez na obtenção dos resultados e menor custo e risco de contaminação no laboratório. Isso credencia a PCR-Teq para estudos epidemiológicos e para determinação de equinos portadores.