Efeito da proteína Hlp micobacteriana na indução da secreção de mediadores inflamatórios por células epiteliais alveolares humanas / Mycobacterial protein Hlp effect in inducing the secretion of inflammatory mediators by human alveolar epithelial cells

RESUMO

A resposta imune inata local ativada pelo patógeno, através do seu reconhecimento por receptores como os toll-like (TLR), é determinante na natureza da resposta imune adquirida gerada após a infecção. Neste contexto, tem sido demonstrado que o reconhecimento do DNA micobacteriano rico em motivos CpG não metilados pelo receptor TLR-9 representa uma via importante na ativação da produção de IL-12 por células dendriticas favorecendo a subseqüente geração de resposta imune Th1. as micobacterias expressam em abundância uma proteína catiônica semelhante às histonas de outras bactérias, denominada Hlp, presente tanto no envelope como no nucleóide bacteriano. A Hlp localizada no envoltório micobacteriano tem sido implicada no processo de adesão das micobactérias ao epitélio respiratório visto que interage com proteoglicanas da superfície destas células. Por outro lado, foi mostrado que o complexo Hlp-CpG ativa a sinalização celular via TLR-9, induzindo a produção de mediadores inflamatórios em macrófagos in vivo e um aumento na resistência à infecção por Mycobacterium tuberculosis in vivo. As micobactérias penetram no hospedeiro através das vias aéreas superiores, e as células epiteliais expressam receptores da imunidade inata, contribuindo para a resposta imune inata local. Este trabalho teve como objetivo investigar a capacidade da proteína Hlp de ativar, quando combinada ou não a oligonucleotideo sintético CpG, a resposta imune inata de células epiteliais alveolares. Para atingir este objetivo, utilizamos a proteína rHlp-oligonucleotideo CpG induziu uma produção aproximadamente 2 vezes maior de interleucina 8 (IL-8) em relação às células só estimuladas com CpG e de quase quatro vezes em relação aos níveis observados com a célula só estimulada com rHlp, indicando um sinergismo entre estes dois estímulos. Este mesmo efeito da Hlp sobre a CpG foi observada em macrófagos, quando a produção do fator de necrose tumoral alfa [TNF-alfa] foi mensurado. Também testamos a capacidade de peptídeos sintéticos derivados da Hlp compreendendo os sítios de ligação a DNA e proteoglicanas, respectivamente, quanto à capacidade de mimetizar o efeito imunoestimulador da proteína inteiraEstes ensaios confirmaram que a presença de um sitio de ligação a DNA na molécula é essencial para sua atividade imunoestimuladora sobre o CpG. Finalmente, quando passamos a utilizar a micobacteria interia em vez da rHlp como estimulo, a adição de CpG ao M. smegmatis selvagem, mas não mutante para o gene hlp, aumentou a produção de IL-8 e RANTES pelas células epiteliais. Os resultados descritos acima indicam que as células epiteliais respiratórias podem reconhecer micobacterias via TLR-9 e, assim, participar da resposta imune inata no sitio da infecção. Dentro deste contexto, aliado ao fato de tratar-se de uma proteína muito conservada encontrada em todas as micobactérias, a Hlp tem potencial de, quando combinada a DNA, ser empregada tanto como um bom imunógeno, assim como adjuvante em intervenções imunes contra as micobacterioses tais como a vacinação intranasal.