Analysis by fluorescence microscopy and flow cytometry of Monoclonal antibodies produced against cell surface antigens

RESUMEN

La reactividad de siete anticuerpos monoclonales contra antígenos de superficie de las células de mieloma Sp2/O-Ag14 fue analizada simultáneamente por microscopía de fluorescencia y por citometría de flujo. Se incubaron 1 x 10**6 células de Sp2/O-Ag14 con 200 micronl de anticuerpo monoclonal a 4-C por 30 min. Luego de lavar 2 veces con PBS las células fueron incubadas a 4-C por 30 minutos con una dilución 1400 de anticuerpos de carnero anti-immunoglobulinas de ratón, conjugados a isotiocianato de fluoresceína. Luego de lavar tres veces con PBS, las células se utilizaron para el análisis. Por microscoía de fluorescencia se detectaron diferentes patrones de reactividad con los anticuerpos monoclonales. Estos patrones fueron denominados homogéneo anular, parchos anulares, parchos putiformes, difuso y homogéneo. Estos patrones podrían representar diferentes espítopes reconocidos monoclonales contra los antígenos de superficie de Sp2/O-Ag14 varió entre un 79 a un 90% al analizarse por cimetría de flujo con el sistema EPICS V. Al compararla con la microscopía de fluorescencia, la citometria de flujo determinó de una forma mas rápida, sensitiva y cuantitativa la reactividad de los diferentes anticuerpos monoclonales contra antígenos de superficie de las células Sp2/O-Ag14