Aislamiento y caracterización de las células madre mesenquimales de la pulpa dentaria humana / Isolation and characterization of stem cells mesenchymal of human dental pulp

RESUMEN

Las células madre mesenquimales de la pulpa dentaria han surgido como una herramienta promisoria en la medicina regenerativa. El objetivo de la presente investigación es establecer el cultivo de las células madre mesenquimales de la pulpa dentaria humana. Estas fueron aisladas de terceros molares retenidos de pacientes entre 15 y 24 años, con técnica de disgregación enzimática y cultivadas en medio DMEM-F12, suplementado con 15% de SFB , 100 ?M L-ácido ascórbico 2-fosfato, 2 mM L-glutamina, 100 U/mL de penicilina, 100 µg/mL de estreptomicina y 2 µg/mL de anfotericina B . Las células fueron observadas diariamente bajo microscopio. Pruebas inmunohistoquímicas mostraron en las poblaciones de células aisladas la existencia de células mesenquimales STRO-1+, marcador de células madre mesenquimales, también expresaron CD146+ y no expresaron CD45-, marcador de células hematopoyéticas. Las células aisladas mostraron capacidad de autorrenovación y eficiencia de formación de colonias. En el presente estudio, en las poblaciones de células aisladas se identificaron células con características de células madre mesenquimales, como su capacidad de adherirse a las placas plásticas en cultivo, formar colonias altamente proliferativas, su morfología fusiforme y la expresión consistente de marcadores de superficie que caracteriza células madre mesenquimales adultas de pulpa dentaria. Sin embargo, faltaría determinar su capacidad de diferenciación para cumplir con los criterios básicos para definirlas como células madre

ABSTRACT

Mesenchymal stem cells dental pulp-derived have emerged as a promising tool in regenerative medicine. The objective of the present investigation is to establish the culture of mesenchymal stem cells of dental pulp human. The dental pulp mesenchymal cells were isolated from impacted third molars of patients between 15-24 year-old. The dental pulp tissue was extracted, enzymatic digestion technique and culture in medium DMEM-F12, supplemented with 15% de SFB , 100 ?M L-ascorbic acid 2- phosphate, 2 mM L-glutamine, 100 U/mL de penicillin, 100 µg/mL de streptomycin y 2 µg/mL de amphotericin B. Cells were observed daily under microscope. Immunocytochemistry tests showed cells STRO-1+ mesenchymal stem cell marker. These cells also expressed CD146+ and no expressed CD45- hematopoietic stem cell marker. The isolated cells showed self-renewal capabilities and colony-forming efficiency. In this study, isolated cell populations were identified cells with mesenchymal stem cell characteristics, such as its ability to adhere to plastic culture plates, highly proliferative colony forming, fusiform morphology and consistent expression of surface markers characterized adult mesenchymal stem cells from dental pulp. However, missing differentiating their ability to meet the basic criteria to define them as stem cells