Optimización de las condiciones de purificación de T4 ADN ligasa / Optimization of the purification conditions for the T4 DNA ligase

RESUMEN

El procedimiento reportado por Davis et al., 1980. para purificar T4 ADN ligasa, ha sido modificado con el objetivo de obtener una preparación de la enzima virtualmente libre de exonucleasas. Se modificaron las condiciones de elución de las columnas de P11 e hidroxilapatita en vez de eludir en un paso, en ambos se aplicó un gradiente lineal, de 300 a 800 mM de cloruro de sodio en la columna de P11 y de 0 a 800 mM en la de hidroxilapatita. Este procedimiento permitió la eliminación de nucleasas y la obtención de una preparación enzimática de gran calidad