Avaliação de biomarcadores de gravidade em cães naturalmente infectados por Leishmania infantum classificados clinicamente e estratificados quanto à carga parasitária em estudos de corte transversal / Evaluation of biomarkers of severity in dogs naturally infected with Leishmania infantum classified clinically and stratified for parasite load in cross-sectional studies

RESUMO

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é, principalmente, causada pelo protozoário Leishmania infantum nas Américas, podendo acometer o Homem e animais. Dentre estes, o cão é considerado o principal reservatório doméstico do parasito. O curso da LV canina (LVC) varia entre os animais, podendo alguns se mostrar resistentes à infecção, se mantendo subclínicos, e outros susceptíveis, que irão desenvolver sinais da doença. O estado de resistência ou susceptibilidade à LVC reflete na gravidade da infecção do animal, e não pode ser definido pelo quadro clínico apresentado ou por qualquer parâmetro isolado de resposta imune. OBJETIVO: Avaliar a carga parasitária como biomarcador parasitológico, as proteínas LJM11/LJM17 como biomarcadores de exposição à saliva do vetor, e identificar biomarcadores inflamatórios de gravidade da infecção por L. infantum em cães. Primeiramente, foi realizada a padronização de uma ferramenta diagnóstica de PCR quantitativa (qPCR), utilizando diferentes amostras biológicas (aspirado esplênico, linfonodos, pele, sangue, medula óssea e swab conjuntival) de cães sintomáticos provenientes da área endêmica de Jequié-BA. A avaliação da carga parasitária de L. infantum teve seu desempenho comparado com outras técnicas diagnósticas (cultura de aspirado esplênico, teste rápido e ELISA para LVC) empregando a análise de classe latente (ACL). Para essa análise, foi construída uma variável latente a ser empregada como padrão ouro para avaliação da acurácia desses métodos. Na avaliação inicia dos cães sintomáticos, a qPCR detectou DNA do parasita em 100%...

ABSTRACT

INTRODUCTION: In the Americas, visceral leishmaniasis (VL) is caused by the protozoan Leishmania infantum, which can affect humans and animals. Among these, dog is considered the main domestic reservoir of this parasite. Canine VL (CVL) clinical outcome varies among animals, some of which may be resistant to infection remaining subclinical, and others may be susceptible showing signs of the disease. The state of resistance or susceptibility to CVL reflects on the severity of infection in the animal and cannot be defined solely by the clinical condition presented or by any isolated parameter of the immune response. OBJECTIVE: Assess parasite load as parasitological biomarkers, LJM11/LJM17 proteins as sandfly saliva exposure biomarkers, and identify inflammatory biomarkers that indicates L. infantum infection severity in dogs. Firstly, we performed the standardization of a quantitative PCR diagnostic tool (qPCR) using different biological samples (splenic aspirate, lymph nodes, skin, blood, bone marrow and conjunctival swab) of symptomatic dogs from the endemic area of Jequié-BA. The evaluation of the parasitic load of L. infantum had its performance compared to other diagnostic techniques (splenic aspirate culture, rapid test and CVL ELISA) using latent class analysis (LCA). In this analysis, a latent variable was constructed to be used as a gold standard to evaluate the accuracy of these methods. In the initial evaluation of the symptomatic dogs, qPCR detected DNA from the parasite in 100%...