Validation of an adherence assay to detect group mutans streptococci in saliva samples / Validación del Test de adherencia para el recuento de estreptococcos del grupo mutans en muestras de saliva

ABSTRACT

The aim of the present study was to validate and establish a cut off point and the predictive value of an adhesion test (AA-MSMG), as a microbiological method for evaluating cariogenic risk. The study is based on a variant (20% sucrose) of a selective medium descripted by Gold et al. (MSMG). This method differentiates mutans group streptococci (MGS) by exacerbating the production of insoluble extracellular polysaccharide which gives adhesion to surfaces such as glass, plastic and dental enamel. Caries assessment according to ICDAS was conducted in 154 patients (aged >21 years) who were attended at Preventive and Community Dentistry Department, School of Dentistry, University of Buenos Aires, Argentina, between August 2017 to August 2018. The study population was assigned to groups according to the presence/ absence of caries lesions: Group A: ICDAS lesion code = 0 (L=0) on all dental surfaces (n=23); and Group B: L>1 (n=131). After mouth-rinsing with distilled water, saliva samples were collected with fasting and hygiene protocol, and sent immediately to the Microbiological Diagnosis Laboratory, Microbiology Department, School of Dentistry, University of Buenos Aires. Samples were homogenized and serially diluted to the tenth. 100 pl of the dilutions were cultured in 25 cm² sterile plastic flasks containing 9.9 ml of modified selective medium described by Gold (MSMG-selective and differential medium). Cultures were incubated in an anaerobic atmosphere at 36 ± 1°C for 48 hours. The supernatants were eluted and the samples washed with sterile distilled water. Colony forming unit counts were performed by calibrated researchers (Kappa >0.75) using a stereoscopic microscope at 50X. Mutans group streptococci (MGS) counts ranged from 1x10(4) to 1x10(5) CFU/ml in group A, and were higher than 1x10(6) CFU/ml in Group B. Statically analysis of results (ROC) showed that the AAMSMG has a satisfactory predictive value (91%) and established a cutoff point in 1.68x10(5) UFC / ml. This would indicate that individuals whose MGS saliva counts are higher than the cutoff value would be 5 times more likely to develop dental caries. Adherence assay could be a useful microbiological predictor of caries risk.

RESUMEN

El objetivo del presente estudio fue validar, establecer el punto de corte y valor predictivo de una técnica microbiológica para evaluar el nivel de estreptococos del grupo mutans en saliva. La técnica consiste en un test de adherencia que emplea un medio selectivo modificado (20% sacarosa) descripto por Gold et al. (TA-MSMG). Este método permite diferenciar a los estreptococos del grupo mutans (SGM) exacerbando la producción del polisacárido extracelular insoluble que le confiere adhesión a superficies como vidrio, plástico y esmalte dental. De acuerdo con los criterios de ICDAS se sembraron 154 salivas de pacientes mayores de edad, que asistieron al Servicio de Odontología Preventiva y Comunitaria de la Facultad de Odontología de la Universidad de Buenos Aires entre los meses de agosto de los años 2017 y 2018. La población estudiada fue asignada a dos grupos según la presencia / ausencia de lesiones de caries: Grupo A: código de lesión ICDAS = 0 (L = 0) en todas las superficies dentales (n = 23); y Grupo B: L> 1 (n = 131). Después de realizar un enjuague bucal con agua destilada, las muestras de saliva se recogieron según protocolo (ayuno de 4 horas y suspensión de higiene dental de 12 hs). Las muestras se remitieron de inmediato al Laboratorio de Diagnóstico Microbiológico, Departamento de Microbiología de la Facultad de Odontología, Universidad de Buenos Aires. Para su procesamiento, las muestras fueron homogeneizadas y diluidas al décimo. Se cultivaron 100 pl de las diluciones en botellas de plástico estériles de 25 cm² que contenían 9,9 ml de medio de Gold modificado (MSMG-20% sacarosa). Los cultivos se incubaron en atmósfera anaeróbica a 36 ± 1°C durante 48 horas. El sobrenadante se eluyó y las muestras se lavaron con agua destilada estéril. Los recuentos de unidades formadoras de colonias SGMfueron realizados por investigadores calibrados (Kappa >0.75) utilizando un microscopio estereoscópico a 50X. Los recuentos de SGM presentaron una variación entre 1x10(4)y 1x10(5) UFC/ml en el grupo A, mientras que en el Grupo B fueron superiores a 1x10(6) UFC/ml. El análisis estadístico de los resultados determinó una curva ROC que establece para el TA-MSMG un valor predictivo del 91% y un punto de corte en 1.68x10(5) UFC SGM / ml. Esto indicaría que los individuos cuyos recuentos en saliva de SGM sean superiores al valor de corte, tendrían 5 veces más posibilidades de desarrollar caries (5:1). Este método podría ser un instrumento útil al momento de evaluar (indicador microbiológico) el riesgo cariogénico del paciente.