Single- and Multispecies Biofilms by Escherichia coli, Staphylococcus aureus, and Salmonella spp. Isolated from Raw Fish and a Fish Processing Unit / Formação de Biofilmes Mono e Multi-espécies de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, e Salmonella spp. Isoladas de Pescado Cru e Indústria de Pescado

ABSTRACT

ABSTRACT The consumption of fish by the Brazilian population is increasing. However, fish and seafood are highly perishable and can be contaminated with several microorganisms. In addition, the possibility of biofilm formation is a greater cause for concern. In this study, biofilm formation was evaluated in single- and multispecies cultures at 25°C for incubation periods of 0, 4, 8, 24, and 48h in stainless steel coupons (size, 1.0×1.0cm) immersed in tryptic soy broth. The characteristics of the formed biofilms after sanitizing by immersing the coupons in 200ppm sodium hypochlorite solution for 10min were also evaluated under the same experimental conditions but with some modifications. Biofilm structure was evaluated using scanning electron microscopy. Analysis of single-species biofilms indicated that all bacterial strains formed biofilms at different intervals without any statistically significant difference. However, comparison of the growth of single- and multispecies cultures indicated a significantly higher biofilm formation by the pure cultures. In multispecies biofilms, compared with the other microorganisms, growth of Salmonella spp. was significantly lower for all tested incubation periods; whereas, of Staphylococcus aureus was significantly higher than that of E. coli until 8h of incubation; the differences in growth were not significantly different after this incubation period. Sanitizing with sodium hypochlorite was effective because no cell growth was observed in the coupons that were treated with 200ppm sodium hypochlorite for 10min. This study demonstrated the ability of isolated microorganisms to form biofilms, reinforcing the need for food handling establishments to adopt good manufacturing practices, developing adequate protocols for cleaning and disinfecting surfaces and equipment used in food production, maintaining and replacing equipment when necessary.

RESUMO

RESUMO A população brasileira tem apresentado um elevado consumo de peixes, no entanto pescados são alimentos altamente perecíveis e podem ser contaminados por uma diversidade de microrganismos. A situação ainda é mais alarmante quando se trata da formação de biofilmes. Para verificação da formação de biofilme, as cepas foram testadas dentro de cultivos mono e multi-espécies a 25°C durante o tempo total de 48h, onde as análises foram realizadas no tempo 0 e nos intervalos de 4, 8, 24 e 48h em cupom de aço inoxidável medindo 1,0x1,0cm, imersos em caldo TSB (Tryptic Soy Broth).O comportamento dos biofilmes formados, diante da sanitização por imersão dos cupons em solução de hipoclorito de sódio a 200ppm por 10 minutos, também foi avaliado, nas mesmas condições citadas acima, com algumas particularidades. A avaliação estrutural foi procedida por microscopia de varredura eletrônica (MEV). Nos resultados de biofilmes mono-espécie, foi verificado que todas as cepas foram capazes de formar biofilme, nos diferentes tempos, sem diferenças estatisticamente significativas. Entretanto, comparando-se o crescimento de culturas mono e múltiplas espécies observou-se formação de biofilme, estatisticamente maior, entre as culturas puras. Nas culturas multi-espécies, Salmonella spp. apresentou crescimento, estatisticamente menor, em todos os tempos, entre os microrganismos testados, enquanto S. aureus apresentou maior crescimento que E. coli até 8 horas de incubação, deste tempo em diante a diferença não foi significativa. Quanto ao comportamento frente sanitização com hipoclorito, o sanitizante foi eficaz, uma vez que não foi observado crescimento celular nas análises dos cupons tratados com a solução de hipoclorito a 200ppm por 10 minutos. Este estudo demonstrou a capacidade dos microrganismos isolados em formar biofilmes, reforçando, a importância dos estabelecimentos manipuladores de alimentos investirem em treinamento de Boas Práticas de Fabricação, desenvolvimento de protocolos adequados de limpeza e desinfecção de áreas e equipamentos envolvidos na produção de alimentos e manutenção e troca desses sempre que se fizer necessário.