Estandarización y validación de pruebas de elisa tipo indirecto para la determinación de los niveles de anticuerpos IgG e IgE antileishmania, como método complementario para el diagnóstico y seguimiento de la respuesta al tratamiento / Standardization and validation of elisa indirect type tests for the determination of the levels of IgG and IgE antileishmania antibodies, as a complementary method for diagnosis and followup of the response to treatmen

RESUMEN

La leishmaniasis cutánea se caracteriza por la inducción de una respuesta inmune celular y humoral, siendo los niveles de anticuerpos IgG e IgE indicadores serológicos del diagnóstico, la progresión y resolución de la enfermedad. En el presente estudio se estandarizaron dos pruebas de ELISA indirecto para determinar los niveles séricos de anticuerpos IgG o IgE contra antígeno soluble de Leishmania braziliensis (ASL). Se trabajó a partir de la cepa de L. braziliensis (MHOM/BR/75/M2903). En el ELISA IgE se hizo un pretratamiento del suero con anticuerpos antiIgG humano y Polietilenglicol (PEG); la dilución óptima de la muestra para ambos ELISA fue 1/21, la dilución del conjugado fue 1/500 para el ELISA IgG y 1/100 para el IgE. Para el ELISA IgG estandarizado se encontró un índice de correlación de Kappa de 1 (p<0,05), frente al ELISA comercial rBiopharm®. Con una sensibilidad del 100%; 100% de especificidad, 100% valor predictivo positivo y 100% valor predictivo negativo. Sin embargo ambos test de ELISA presentaron reacciones cruzadas con anticuerpos anti-Trypanosoma. La validez de los resultados demuestran que los ELISAs estandarizados pueden ser utilizados como herramienta de diagnóstico y seguimiento al tratamiento leishmanicida.

ABSTRACT

Cutaneous leishmaniasis is characterized by the induction of a cellular and humoral immune responses, at levels of IgG and IgE indicators serological diagnosis, progression and resolution of disease. In this study two indirect ELISA tests were standardized to determine serum levels of IgG or IgE antibodies against soluble Leishmania braziliensis antigen (ASL). We worked from the strain of L. braziliensis (MHOM / BR /75 / M2903). In the IgE ELISA pretreatment serum was done with anti-human IgG and Polyethylene glycol (PEG) antibodies; the optimal dilution of the sample for both ELISA was 1/21, the conjugate dilution was for 1/500 and 1/100 IgG ELISA for IgE. For standardized ELISA IgG index Kappa correlation of 1 (p <0.05) compared to commercial ELISA r-Biopharm® found. With a sensitivity of 100%; 100% specificity, 100% positive predictive value and negative predictive value 100%. However both ELISA test showed cross-reactions anti-trypanosome antibodies. The results demonstrate that both ELISA can be used as diagnostic and monitoring tool. Being necessary to continue studies to validate these procedures and identify other possible cross-reactions.