Metodología para la evaluación automatizada de la expresión del receptor de vitamina D mediante técnica inmunocitoquímica / Methodology of automated Vitamin D receptor immunocytochemical expression análisis

RESUMEN

Introducción: la citología permite examinar células de un tejido de manera mínimamente invasiva, sin embargo, la capacidad de realizar técnicas complementarias como la inmunocitoquímica (ICQ) no está exenta de dificultades. Es el objetivo de nuestro trabajo presentar una metodología que permita la utilización de ICQ automatizada asociada a un análisis automatizado mediante técnica de patología digital. Métodos: se incluyeron 5 sujetos sanos y se obtuvieron muestras de superficie ocular utilizando un citocepillo. La muestra fue procesada de manera automatizada mediante citología en fase líquida. Posteriormente se realizó ICQ automatizada para detectar la positividad nuclear del receptor de vitamina D. Para la evaluación, se utilizaron dos métodos: cuantificación directa bajo microscopio de luz y análisis automatizado usando analizador de imágenes en las diapositivas digitales obtenidas con un Scanner. El porcentaje de positividad encontrado con ambos métodos fueron comparados utilizando la prueba de Kappa. Resultados: todas las muestras presentaron una celularidad adecuada. En todos los casos fue posible realizar ICQ automatizada, más aún, todas las muestras presentaron una calidad óptima. Al comparar ambos métodos (manual versus automatizado) se observó un nivel de acuerdo sustancial (Kappa=0,69). Conclusiones: la metodología presentada en este manuscrito permite la evaluación automatizada de marcadores inmunohistoquímicos de la superficie ocular de manera mínimamente invasiva, siendo similar al conteo manual, pero más objetivo y reproducible. Esta técnica podría ser útil para el estudio proteómico en patologías como la enfermedad por ojo seco.

ABSTRACT

Introduction: Cytology tests use small amounts of tissue samples for diagnosis as a minimally invasive technique; however, the ability to perform complementary methods such as immunocytochemistry (ICC) is not without difficulties. The aim of our work is to present a method that allows the use of automated ICC associated with an automated image analysis using digital pathology. Methods: Five healthy subjects were included, and ocular surface samples were obtained using a cytobrush. The sample was processed as liquid-based cytology. Automated ICC was subsequently performed to detect vitamin D receptor nuclear positivity. Two methods were used for evaluation manual counting under a light microscope and automated analysis using an image analyzer on digitized slides. The percentage of positivity found in both methods was compared using the Kappa test. Results: All samples presented adequate cellularity. In all cases, it was possible to perform automated ICC; moreover, all samples presented optimal quality. When comparing both methods (manual versus automated), a substantial level of agreement was seen (Kappa=0.69). Conclusions. The method presented in this manuscript allows the minimally invasive automated evaluation of ocular surface ICC markers, being like manual counting but more objective and reproducible. This technique could be useful for proteomic study in pathologies such as dry eye disease.