Reparo de defeitos ósseos críticos usando hidroxiapatita sintética ou bovina com ou sem fração mononuclear da medula óssea: análise histomorfométrica e imuno-histoquímica / Repair of critical size bone defects using synthetic or bovine hydroxyapatite with or without bone marrow mononuclear fraction: histomorphometric and immunohistochemical analysis

RESUMO

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a regeneração óssea de defeitos ósseos críticos na calvária de ratos com a utilização de enxerto xenógeno Bio-Oss Small ( Bio-Oss® Geistlich Pharma AG, Wolhusen, Suíça) e hidroxiapatita sintética, (Alobone poros Osseocon Biomateriais Ltda., Rio de Janeiro/RJ, Brasil ) puros e enriquecidos com a fração mononuclear medular de célula tronco. Material e métodos: quarenta ratos adultos jovens machos, Sprague Dawley, com doze semanas distribuídos em cinco grupos com oito animais, sendo assim denominados grupo controle, grupo 1, grupo 2, grupo 3, e grupo 4. Além dos quarenta ratos adultos jovens, mais oito ratos adultos jovens machos, Sprague Dawley, com doze semanas foram utilizados como doadores de medula óssea. Os cinco grupos foram submetidos a defeitos ósseos críticos com trefina de 8 (oito) milímetros de diâmetro, na região temporoparietal. No grupo controle não teve a colocação de biomaterial, no grupo 1 os defeitos críticos foram preenchidos por hidroxiapatita sintética ,0.10 gramas, (Alobone poros Osseocon Biomateriais Ltda., Rio de Janeiro/RJ, Brasil), no grupo 2 foram preenchidos com hidroxiapatita bovina,0,10 gramas, Bio-Oss Small (Bio-Oss® Geistlich Pharma AG, Wolhusen, Suíça), no grupo 3 os defeitos críticos foram preenchidos por hidroxiapatita sintética,0,10 gramas, (Alobone poros Osseocon Biomateriais Ltda, Rio de Janeiro/RJ, Brasil) enriquecida com 300 µl da fração mononuclear medular de células tronco na concentração de 1 x 10 6, obtida dos animais doadores de medula, e no grupo 4 os defeitos críticos foram preenchidos por hidroxiapatita bovina, 0,10 gramas, Bio-Oss Small (Bio-Oss® Geistlich Pharma AG, Wolhusen, Suíça) também enriquecida com 300 µl da fração mononuclear medular de células tronco na concentração de 1 x 10 6, obtida dos animais doadores de medula Após oito semanas, os cinco grupos tiveram todos os animais eutanasiados, por intermédio de overdose anestésica de Pentobarbital (180 mg/ kg intraperitoneal). Os grupos, foram submetidos a análises histomorfométrica, preparados corados com tricrômico de Masson, e técnicas imuno-histoquímica de VEGF e Osteopontina. Não existiu diferença estatisticamente significativa entre os grupos 1, 2, 3 e 4, porém existiu entre o grupo controle e os demais grupos que receberam tratamento para regeneração dos defeitos ósseos críticos.

ABSTRACT

The present study aimed to evaluate the bone regeneration of critical bone defects in the calvaria of rats using xenogenous grafts, Bio-Oss Small (Bio-Oss® Geistlich Pharma AG, Wolhusen, Switzerland) and synthetic hypooxypatite, (Alobone poros Osseocon Biomateriais Ltda., Rio de Janeiro / RJ, Brazil) pure or enriched with the medullary mononuclear fraction of stem cells, in the material and methods: forty young adult male rats, Sprague Dawley, were used, with twelve weeks distributed in five groups with eight animals, being thus named control group, group 1, group 2, group 3, and group 4. In addition to the forty young adult rats, eight more animals were used as bone marrow donors. The Five groups were submitted to critical size bone defects with 8 (eight) millimeter diameter trephine, in the temporoparietal region. In the control group there was no biomaterial placement, in group 1 the critical size bone defects were filled with synthetic hydroxyapatite, 0,10 grams, (Alobone poros Osseocon Biomateriais Ltda., Rio de Janeiro / RJ, Brazil), in group 2 they were filled with bovine hydroxyapatite,0,10gramas, Bio-Oss Small (Bio-Oss® Geistlich Pharma AG, Wolhusen, Switzerland), in group 3 the critical size bone defects were filled with synthetic hydroxyapatite,0,10 grams, (Alobone poros Osseocon Biomateriais Ltda., Rio de Janeiro / RJ, Brazil) enriched with 300 µl of BMMF containing 1x106 cells, obtained from bone marrow donors animals, and in group 4 the critical size bone defects were filled with bovine hydroxyapatite, 0,10 grams Bio-Oss Small (Bio-Oss® Geistlich Pharma AG, Wolhusen, Switzerland) enriched with 300 µl of BMMF containing 1x106 cells, obtained from bone marrow donors animals. After eight weeks, all five of animals were euthanized by Pentobarbital anesthetic overdose (180 mg / kg intraperitoneal). The groups were submitted to histomorphometric analysis, using Masson's trichrome Stain, and immunohistochemical techniques of VEGF and Osteopontin. There was no statistically significant difference among groups 1, 2, 3 and 4, but it did exist with the control group and the other groups that received treatment for the regeneration of critical bone defects.