Metaloproteinases de matriz e seus moduladores induzidos na infecção pelo HPV in situ e in vitro / Matrix metalloproteinases and their modulators induced in HPV infection in situ and in vitro

RESUMO

A infecção por HPV tem se tornado uma das infecções sexualmente transmissíveis mais prevalentes no mundo, sendo a causa primária do câncer cervical. O processo inflamatório cervical causado pelo HPV e subsequente desenvolvimento de lesões pre-malignas são induzidas direta ou indiretamente por um sistema complexo de interação entre oncogenes e fatores do hospedeiro, secretados por queratinócitos, células imunes e matriz extracelular (MEC). O desenvolvimento e modelamento da MEC pode ser regulado através da expressão de metaloproteinases (MMP), que tem sido associada a diversos tipos de tumores. Assim, no presente trabalho objetivamos identificar e associar as expressões de MMP -2, -7 e -9 e seus moduladores TIMP-2, EphA2, EfrinaA1 e TNF-α em lesões de colo uterino. Para isto, incluímos 30 mulheres com idades entre 24 e 57 anos. Destas, 15 apresentaram lesões de colo uterino de alto grau (HSIL) e 15 eram mulheres histerectomizadas sem lesões associadas a infecção pelo HPV. Avaliamos a expressão das MMPs por imunohistoquímica no epitélio e estroma das amostras incluídas. Observamos um aumento de todas as MMPs e seus moduladores no estroma das lesões do grupo com HSIL comparados com o grupo controle, principalmente MMP-2, -9 e EphA2, reforçando papéis no processo de degradação e invasão. Desta forma, concluímos que MMP-2, MMP-9 e EphA2 possuem papel no desenvolvimento de lesões de alto grau. Além do trabalho in vivo, nosso estudo buscou avaliar o papel in vitro da citocina pró-inflamatrória TNF-α na modulação da expressão das MMPs e seus moduladores em linhagens cervicais de queratinócitos infectados (HeLa) ou não (C33A) por HPV. Para tanto, avaliamos a expressão de RNAm destes marcadores por PCR em tempo real (qPCR). Observamos um aumento da expressão do RNAm destes marcadores, exceto MMP-9 e EphA2, em HeLa quando relacionados com a expressão em C33A, sugerindo que a presença do HPV de alto risco em HeLa possa estar influenciando na expressão gênica destes marcadores. Diante disto, concluímos que TNF-α possui papel modulador na expressão de RNAm das MMPs e seus moduladores, exceto EphA2, exclusivamente em linhagens de queratinócitos infectados pelo HPV.

ABSTRACT

HPV infection has become one of the most prevalent sexually transmitted infections in the world, being the primary cause of cervical cancer. The HPV cervical inflammatory process and subsequent pre-malignant lesions development are induced directly or indirectly by a complex system of interaction between oncogenes and host factors, secreted by keratinocytes, immune cells and extracellular matrix (ECM). The ECM development and modeling can be regulated through the expression of metalloproteinases (MMP), which has been associated with several types of tumors. Thus, in the present work we aimed to identify and associate the MMP-2, -7 and -9 and their modulators TIMP-2, EphA2, EfrinaA1 and TNF-α expressions in cervical lesions. For this, we included 30 volunteers between the ages of 24 and 57 years. Of these, 15 presented with high grade cervical lesions (HSIL) and 15 were hysterectomized volunteers without HPV-associated lesions. We evaluated the MMPs expression by immunohistochemistry in the epithelium and stroma of the included samples. We observed an increase in all MMPs and their modulators in the stromal lesions of the HSIL group compared to the control group, mainly MMP-2, -9 and EphA2, reinforcing roles in the degradation and invasion process. In this way, we concluded that MMP-2, MMP-9 and EphA2 play a role in the outcome of high-grade lesions. In addition to in vivo work, our study aimed to evaluate the in vitro role of the proinflammatory cytokine TNF-α in modulating the MMPs expression and their modulators in cervical keratinocytes lineages infected (HeLa) or not (C33A) by HPV. For this, we evaluated the mRNA expression of these markers by real-time PCR (qPCR). We observed increased mRNA expression of these markers except MMP-9 and EphA2 in HeLa when related to C33A expression, suggesting that the presence of high-risk HPV in HeLa may be influencing the gene expression of these markers. We concluded that TNF-α modulated MMPs mRNA expression and its modulators, excepted by EphA2, only in HPV infected keratinocytes.