Benzydamine induces apoptosis in astrocytes in vitro / Benzadamina induz apoptose em astrócitos in vitro

ABSTRACT

Objective: the present work aims to evaluate the Benzydamine (BZD) effect on cell viability in astrocyte culture and investigated the death mechanism involved with its cytotoxic effect. Methods: in order to evaluate cell viability, the 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reduction assay was used, while flow cytometry was used to verify cell damage. The immunofluorescence assay was used to verify the expression of the marker's caspase-8, caspase9 and p65 subunit of Factor nuclear kappa B (NFκB). A statistical analysis for MTT assay and Flow Cytometry were made using ANOVA with Dunett's post-test; Student's t-test was made for the Immunofluorescence. Significance was set at p < 0.05. Results: the MTT reduction assay showed that BZD (3.1 to 100 µg/mL) caused a decrease in astrocytes viability. The flow cytometry showed that the cytotoxic effect of BZD was caused by the activation of the apoptotic death pathway, evidenced by the externalization of phosphatidylserine. The immunofluorescence revealed an increase in caspase-8 expression and no alteration in caspase-9 expression, demonstrating that there was an activation of the extrinsic pathway of apoptosis. The mean inhibitory concentration (IC50) of BZD (26.13 µg/mL) also caused an increase in NFκB p65 expression. Conclusion: taken together, the results of the present study suggest that BZD has a cytotoxic effect on astrocyte cells, and this effect comes from its ability to activate the extrinsic apoptotic pathway

RESUMO

Objetivo: o presente trabalho tem como objetivo avaliar o efeito da Benzidamina (BZD) na viabilidade celular em cultura de astrócitos e investigar o mecanismo de morte envolvido com seu efeito citotóxico. Métodos: para avaliar a viabilidade celular foi utilizado o ensaio de redução do brometo de 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT), enquanto a citometria de fluxo foi utilizada para verificar o dano celular. O ensaio de imunofluorescência foi utilizado para verificar a expressão do marcador caspase-8, caspase9 e subunidade p65 do Fator nuclear kappa B (NFκB). A análise estatística para ensaio MTT e Citometria de Fluxo foi feita utilizando ANOVA com pós-teste de Dunett; Foi feito o teste t de Student para Imunofluorescência. A significância foi estabelecida em p < 0,05. Resultados: o ensaio de redução do MTT mostrou que o BZD (3,1 a 100 µg/mL) causou diminuição na viabilidade dos astrócitos. A citometria de fluxo mostrou que o efeito citotóxico do BZD foi causado pela ativação da via de morte apoptótica, evidenciada pela externalização da fosfatidilserina. A imunofluorescência revelou aumento na expressão de caspase-8 e nenhuma alteração na expressão de caspase-9, demonstrando que houve ativação da via extrínseca de apoptose. A concentração inibitória média (CI50) de BZD (26,13 µg/mL) também causou aumento na expressão de NFκB p65. Conclusão: em conjunto, os resultados do presente estudo sugerem que o BZD tem efeito citotóxico nas células astrocitárias, e esse efeito advém de sua capacidade de ativar a via apoptótica extrínseca.