Aspectos biológicos e bioatividade de materiais a base de MTA em cultura de células / Biological aspects and bioactivity of MTA based materials in cell culture systems

RESUMO

O objetivo deste estudo foi analisar as respostas biológicas `a materiais utilizados em Endodontia que apresentam na formulação Mineral Trióxido Agregado (MTA) ou cimento Portland (PC) utilizando sistemas de cultura de células. O estudo foi dividido em três capítulos No capitulo 1 foram avaliados bioatividade e biocompatibilidade de dois novos cimentos endodônticos comercialmente disponíveis; MTA Fillapex (MTA-F, cimento endodôntico à base de MTA, Ângelus) e Ephiphany SE (EP-SE, cimento endodôntico a base de resina metacrilato, SybronEndo). A linhagem de osteoblastos humanos (Saos-2) foi utilizada como modelo de estudo. Os resultados de MTT mostraram uma taxa significante de morte celular nas primeiras horas de exposição para todos os materiais avaliados. Entretanto, o grupo MTA-F apresentou aumento de células viáveis após 7 dias de presa. As imagens de microscopia eletrônica de varredura e o resultado de EDS (energia de dispersão atômica) mostraram diferenças na morfologia dos nódulos minerais formados pelos osteoblastos expostos ao MTA-F. No capítulo 2, células de folículo dental humanos (hDFCs) de dois terceiros molares inclusos indicados para exodontia por razões ortodônticas foram isoladas para avaliação da bioatividade e da biocompatibilidade do PC associado a diferentes agentes radiopacificadores em cultura primária de células. Os materiais estudados foram o cimento Portland branco (PC) e as associações de PC com óxido de bismuto (CPBi), óxido de zircônio (CPZir) e tungstato de cálcio (CPCa). Além dos resultados de viabilidade celular e atividade de fosfatase alcalina, a biocompatibilidade do PC e das associações com agentes radiopacificadores foi analisada por imagens de microscopia eletrônica de varredura, que mostraram as hDFCs aderidas aos materiais. O capítulo 3 apresenta um estudo original de pesquisa básica, no qual foi avaliada a hipótese de ativação do fator de transcrição gênica NFATc1 em células de linhagem de osteoblastos humanos após exposição ao PC. O NFATc1 é um fator de transcrição essencial para a diferenciação celular de osteoclastos, o qual é ativado por calcineurina. Curiosamente, estudos recentes demonstraram que os fatores NFAT também desempenham um papel importante na diferenciação e atividade dos osteoblastos. Os resultados obtidos no capítulo 3 com ensaios de western blotting, microscopia confocal, expressão gênica de marcadores moleculares de osteogênese e a co-localização de Osterix com NFATc1 no núcleo de Saos-2 expostas ao eluído de PC forneceram evidências que comprovaram a hipótese proposta. O PC estimulou a ativação de NFATc1 em Saos-2, devido ao influxo de Ca+2 para o ambiente intracelular

ABSTRACT

The aim of this study was to analyze the biological responses to new endodontic materials based on Portland cement (PC) and the PC itself in cell culture systems. The study was divided into three chapters as follows The first chapter describes a research in which the bioactivity and biocompatibility of two new commercially available sealers; MTA Fillapex (MTA-F, PC-based sealer, Angelus) and Ephiphany SE (EP-SE, resin-based sealer, SybronEndo); were evaluated in human osteoblast-like cells (Saos-2). The MTT results showed a significant cell death rate during the first hours of exposure to all test materials. After 7 days of exposure, MTA-F group showed a suitable increasing rate of cell viability. Interestingly, the images of scanning electron microscopy and the result of EDS (energy-dispersive X-ray spectroscopy) showed morphological differences in the mineralized nodules formed by osteoblasts exposed to MTA-F. In Chapter 2, human dental follicle cells (hDFCs) were isolated from two included third molars, which were extracted for orthodontic reasons. The hDFCs were suitable to assess the bioactivity and biocompatibility of PC associated with different radiopacifying agents in primary cell culture system. The materials tested were the white Portland cement (PC) and PC associations with radiopacifying agents bismuth oxide (PCBi), zirconium oxide (PCZir) and calcium tungstate (PCCa). Besides the results of cell viability and alkaline phosphatase activity, the biocompatibility of the PC was corroborated by the images of scanning electron microscopy, which allowed us to visualize the hDFCs adhered to the material surfaces. Chapter 3 presents an original study of basic research, aimed to evaluate the hypothesis of the transcription factor NFATc1 activation in human osteoblast-like cells as a result of exposure to PC. The NFATc1 is a transcription factor essential for osteoclasts differentiation, which is activated by Calcineurin. Curiously, recent studies have shown that NFAT transcription factors play an important role in differentiation and activity of osteoblasts as well. The results obtained with western blotting assay, confocal microscopy, expression of molecular markers of osteoblasts differentiation and the co-location of NFATc1 with Osterix in the nuclei of Saos-2 exposed to PC elute provided evidences that supported the hypothesis proposed. PC stimulated the activation of NFATc1 in Saos-2 due to the influx of Ca+2 to the intracellular environment