Cereal grains and glycerol in Agaricus blazei cryopreservation / Grãos de cereais e glicerol na criopreservação de Agaricus blazei

ABSTRACT

Agaricus blazei is an important commercial basidiomycete studied for its biological activity. However, little has been studied about the preservation techniques of this basidiomycete, and cryopreservation is one alternative. The aim of this study was to evaluate the physical and chemical effects of different cultivation media and glycerol on A. blazei cryopreservation at -20 ºC and at -70 ºC. A solid cultivation medium consisting of agar with ground whole cereal grains (hard endosperm wheat, medium hard endosperm wheat or hard endosperm rye) or malt extract agar, or whole cereal grains (hard endosperm wheat, medium hard endosperm wheat or hard endosperm rye) without agar was used. Cultivation media had zero or 5% glycerol addition. Cultivation medium grains or disks containing mycelia were transferred to cryotubes with glycerol at 5% with or without water and then were cryopreserved at -20 ºC or at -70 ºC. After one-year or two-year cryopreservation, fungus viability was evaluated. The results showed that the physical structure of whole grains of hard and medium hard wheat is effective (p≤0.01) for two-year cryopreservation at -70 ºC as well as the use of glycerol in the cultivation medium or as a cryoprotectant (p≤0.01) at -70 ºC. Cryopreservation at -20 ºC was ineffective (p≤0.01) to preserve fungus viability.

RESUMO

Agaricus blazei é um basidiomiceto de importância comercial amplamente estudado quanto à sua atividade biológica. Entretanto, pouco foi estudado sobre as técnicas de preservação deste basidiomiceto, sendo a criopreservação uma alternativa. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos físicos e químicos de diferentes meios de cultivo e do glicerol na criopreservação de A. blazei à -20 ºC e à -70 ºC. Foi usado meio de cultivo sólido composto por ágar com farinha de grãos inteiros de cereais (trigo textura dura ou semidura ou centeio textura dura) ou ágar extrato de malte, ou grãos de cereais inteiros (trigo textura dura ou semidura ou centeio textura dura) sem ágar. Os meios de cultivo tiveram adição de glicerol (zero ou 5%). Grãos ou discos de meio de cultivo contendo o micélio foram transferidos para criotubos com glicerol a 5%, ou com ou sem água, sendo, em seguida, criopreservados (-20 ºC ou -70 ºC). Após um ou dois anos de criopreservação foi avaliada a viabilidade do fungo. Os resultados mostraram que a estrutura física de grãos inteiros de trigo semiduro ou duro é efetiva (p≤0,01), quando em -70 ºC para criopreservação por dois anos, assim como o uso de glicerol tanto no meio de cultivo ou como solução crioprotetora (p≤0,01). A criopreservação a -20 ºC mostrou-se ineficaz (p≤0,01) na manutenção da viabilidade do fungo.