Efeito de canatoxina sobre células em cultura

RESUMO

Devido a importância do papel exercido por carboidratos presentes na superfície celular em processos de reconhecimento adesão e mitogêneses cresceu paralelamente o interesse de estudar proteínas capazes de interagir com esses glicoconjugados, mais especificamente as lectinas. Na presente tese, foram avaliadas três lectinas de origem vegetal cujo efeito in vitro na divisão celular era desconhecido. As lectinas Mangalô, extraída da semente de Dioclea Lablab, e PIII, extraída da semente de Dioclea grandiflora, mostraram ser mitogênicas para linfócitos normais em cultura. A hemilectina canatoxina, isolada de Canavalia ensiformes, não só não induziu a proliferação celular como foi capaz de inibi-la, tanto em células normais como em células de diversas linhagens tumorais. Além da propriedade citostática, canatoxina exerceu in vitro uma ação citolítica. Foi possível verificar utilizando-se técnicas de imunofluorescência, que canatoxina pode ligar-se em poucos minutos à membrana celular não sendo deslocadas por lavagens sucessivas, mantendo-se irreversível o efeito inibitório na síntese de DNA mesmo após a remoção total da toxina do meio extracelular. O efeito citostático não pode ser modificado por drogas como trifluoperazina e indometacina e os efeitos tóxicos não parecem resultar da produção de radicais livres ou autólise por liberação de enzimas lisossomais. Canatoxina não apresentou nenhuma seletividade para um determinado tipo celular, e tanto células normais quanto células transformadas são afetadas pela toxina. Finalmente, o uso de um sistema in vitro com células isoladas e cultura, deverá ajudar a permitir o esclarecimento do modo de ação de canatoxina

ABSTRACT

As a result of the importance of the role played by carbohydrates present at the cell surface on processes involving cell to cell recognition, adhesion and mitogenesis, there was, in parallel, a growth of interest in the study of proteins capable of interacting with glycoconjugates, more specifically lectins. Three lectins of plant origin were assessed in this thesis for their in vitro effect on cell division. The lectins Mangalô extracted from the seeds of Dolichos lablab, and PIII, extracted from the seeds of Dioclea grandiflora were mitogenic for normal lymphocytes in culture. The hemilectin canatoxin, isolated from Canavalia ensiformis, not only did not induce proliferation, but was capable of inhibiting cell division, both in normal cells and in various cell lines. Canatoxin, above being cytostatic, could have in vitro a cytolytic action as well. It was possible to verify using ummunoflorescence techniques, binding of canatoxin to the cell surface within a few minutes of exposure. This binding was irreversible and so was the inhibitory effect on DNA synthesis. The cytostatic effect was not modified by drugs such as trifluoperazine and indomethacin, and the toxic effects did not seem to depend on the production of free radicals or autolysis by lysossomal enzymes.Canatoxin did not present selectivity for a given cellular type ands both normal and transformed cells were affected by the toxin. Finally, the use of an in vitro system using isolated cells in culture may allow for a better insight in the mode of action of canatoxin