Obtenção e caracterização de uma cepa atenuada de Leishmania Infantum mediante deleção do gene Kharon1

RESUMO

Apesar da vacinação ser considerada a melhor estratégia para prevenir a infecção por Leishmania, não existe até o momento nenhuma vacina segura e eficaz para uso humano disponível. As vacinas atenuadas, consideradas padrão-ouro para proteção contra patógenos intracelulares, têm sido largamente estudadas como estratégia de imunização contra as leishmanioses. Dessa forma, com o objetivo de obter uma cepa atenuada de Leishmania, foi realizado o nocaute do gene Kharon1 (Kh1) em L. infantum, o qual foi descrito como sendo essencial para citocinese das formas amastigotas de L. mexicana.Os mutantes LiKh1-/- foram obtidos com sucesso por meio de recombinação homóloga e a deleção de ambas as cópias do gene foi confirmada por PCR, qPCR e Southern blot. Em seguida foram também obtidos mutantes complementados nos quais o gene Kh1 foi reinserido nos parasitos LiKh1-/- (add back).Apesar das formas promastigotas dos mutantes LiKh1-/- não apresentaram alteração do crescimento quando comparadas com LiWT, parasitos LiKh1-/- apresentam alteração morfológica, que não é detectada nos parasitos complementados. Apesar de Kh1 estar indiretamente relacionado com o transporte de glicose, os mutantes LiKh1-/- não apresentaram alteração da captação de glicose e nem alteração na sensibilidade ao antimônio