O composto 11a-N-Tosil-5-deoxi-pterocarpano, LQB-223, modula o microRNA-7 e a via das MAP kinases ERK1/ERK2 em linhagens de glioblastoma com diferentes perfis de radiorresistência / [The compound 11a-N-Tosyl-5-deoxy-pterocarpan, LQB-223, modulates microRNA-7 and the MAP kinases ERK1 / ERK2 pathway in glioblastoma strains with different radioresistance profiles]

RESUMO

O Glioblastoma (GB) é um astrocitoma altamente agressivo, de grau IV, cujos pacientes apresentam média de sobrevida global de 12 meses. O tratamento padrão baseia-se em uma combinação de cirurgia, radioterapia e quimioterapia com temozolamida. O receptor do fator de crescimento epidermal (EGFR) exerce grande contribuição para a carcinogênese, evolução e resposta ao tratamento em pacientes com GB. Por isso, a sua expressão e suas vias de sinalização, como a via das MAP kinases (MAPK) ERK1/ERK2, encontram-se altamente desreguladas no GB. A inibição da expressão gênica do EGFR e Raf1, pelo supressor tumoral miR-7, é capaz de regular essa via de sinalização em múltiplos níveis resultando na sensibilização de linhagens celulares à radiação ionizante. A despeito do papel do miR-7 na sensibilização, os pacientes podem adquirir resistência ao tratamento. Portanto, o estudo de novos compostos capazes de modular a via de sinalização do EGFR torna-se importante. O objetivo do estudo é caracterizar o perfil de radiorresistência, e avaliar o efeito antitumoral e o mecanismo de ação do composto LQB-223 nas linhagens celulares de GB humano A172 (PTEN mutado), T98G (TP53 e PTEN mutados) e U251 (TP53, EGFR e PTEN mutados). A fim de avaliar o efeito antitumoral do LQB-223 utilizamos os ensaios de viabilidade celular por MTT, de formação de colônias, fragmentação do DNA, perfil do ciclo celular e a exposição de fosfaditilserina por citometria de fluxo...

ABSTRACT

Glioblastoma (GB) is a highly aggressive grade IV astrocytoma. Patients with GB present 12 months average overall survival. The standard treatment is based on a combination of surgery, radiotherapy and temozolamide combined chemotherapy. The epidermal growth factor receptor (EGFR) plays a major role in the carcinogenesis, evolution and response to treatment for patients with GB. Therefore, EGFR and its pathways, like MAP kinases (MAPK) ERK1/ERK2, are highly overexpressed in GB. The tumor suppressor miR-7 is able to inhibit the genic expression of EGFR and Raf1 regulating multiple levels of its signaling cascade resulting in increased sensibility to ionizing radiation in GB cell lines. However, patients acquire resistance to the treatment, which explains the low survival rate for GB. This justifies the need to research new drugs capable of modulating EGFR expression. This project aims at characterizing the radio-resistance, evaluating its effect on tumor and studying LQB-223 mechanism on the GB cell lines A172 (PTEN mutated), T98G (TP53 and PTEN mutated) and U251 (TP53, EGFR and PTEN mutated). MTT cell viability assay were used to access LQB-223 ability to tumor formation, DNA fragmentation, cell cycle and exposure to fosfatidilserine through flow-cytometry. The cell lines response to radiation was evaluated by DNA fragmentation assay and cell cycle. RT-PCR was used to evaluate miR-7 expression, while Western blotting was used for ERK, p-ERK, Ras, Caspase-3, Caspase-3 cleaved and p-H2AX. T98G and A172 showed an expressive G2/M cell accumulation after exposure to de 8, 16 e 24Gy doses of radiation. These doses induced an increased DNA fragmentation only in U251 and T98G cell lines...