Padronização da triagem de alto desempenho de antagonistas para receptores purinérgicos ativados por UTP a partir da mensuração de cálcio intracelular / Standardization of the screening of high performance antagonists For receivers purinergic activated by UTP from Measurement of calcium intracellular

RESUMO

Os receptores purinérgicos são proteínas expressas na membrana plasmática de diversos tiposcelulares e são ativadas por purinas e pirimidinas extracelulares. Eles são classificados emreceptores P1 e P2, de acordo com o tipo de ligante fisiológico, entretanto, os P2R são aindasubdivididos nas classes P2XR, que abrange os subtipos ionotrópicos e P2YR, que agrupa ossubtipos acoplados à proteína G. Dentre os P2YR, os subtipos P2Y2 e P2Y4 vem sendoamplamente estudados em virtude de suas funções sobre diversos sistemas biológicos. Umavez ativados pelo UTP, estes receptores promovem a ativação e inibição de canais iônicos,controlam o fluxo de íons através da membrana, induzem um aumento de cálcio intracelular,além de estimular a proliferação celular. Em vista disso, muitos grupos de pesquisa já vemestudando o P2Y2 e o P2Y4 como alvos terapêuticos para o tratamento de diversas doenças,tais como fibrose cística, doença do olho seco, doença de Alzheimer, entre outras. Entretanto,a escassez de moléculas com propriedade antagonista seletiva sobre estes receptores dificultao avanço da caracterização de novos papéis funcionais associados a eles, e neste contexto, osprodutos naturais podem atuar como uma importante fonte para a descoberta de compostosque apresentem a característica almejada. Por isso, o objetivo deste trabalho foi padronizaruma metodologia de mensuração de cálcio intracelular induzido pelo UTP em células dalinhagem de macrófagos murinos J774.G8 e realizar a triagem de extratos oriundos deprodutos naturais a fim de identificar compostos com atividade antagonista sobre o P2Y2R eo P2Y4R. Para isso, foi padronizado um protocolo de carregamento celular com o indicadorde cálcio Fluo-4AM com posterior leitura dos sinais de cálcio no FlexStation III em células J774.G8...