Determinación de la concentración de 17B estradiol en la saliva de mujeres fértiles durante el ciclo menstrual, por un método inmunoenzimático, competitivo de tipo ELISA / 17B estradiol concentration determination in saliva of fertile women during menstrual cycle by an immunoenzymatic method, competitive of ELISA type

RESUMEN

Se ha demostrado que las hormonas esteroides no conjugadas pueden difundir fácilmentee a la saliva, en donde su concentración es un fiel reflejo de los valroes que se encuentran en la sangre. El presente trabajo aprovecha esta característica para determinar la concentración de 17B B2, en mujeres durante el ciclo menstrual, usando saliva como líquido biológico de fácil obtención y procesamiento y un método inmunoenzimático de fase sólida de tipo competitivo (ELISA) en vez del tradicional radioinmunoanálisis (RIA). El método requiere 17B estradiol como antígeno unido a placas de ELISA y también para curva de calibración; un suero de oveja anti 17B E2 (1er. Ab) y un suero de conejo antiglobulina de oveca (2o. Ab). Este último conjugado a la fosfatasa alcalina, permitió detectar y valorar de una manera indirecta la concentración de la hormona en el estandar o en el problema mediante la actividad enzimática presente en la placa la cual es inversamente proporcional a la concentración de 17B E2 en la muestra. La técnica de ELISA mostró excelentes resultados en sensibilidad un límite de detección de 2.5 pg y linearidad de la curva de calibración de 2.5 a 125 pg. La especificidad depende del anticuerpo utilizado (Calbochem) indica reacción cruzada con esteroides estructuralmente relacionados, como estrona (1.32 por ciento) y estriol (2.46 por ciento) pero no con otro tipo de esteroides. La recuperación evaluada por adición de 50 y 100 pg de 17B E2 a diferentes muestras de saliva fue adecuada (90-95 por ciento). La precisión valorada mediante el coeficiente de variación (CV) osciló en la curva de calibración de 3.4-4.8 (interensayo); en las muestras de saliva fue ligeramente mayor de 4.2-9 por ciento y 4.8-12.1 por ciento para la variación intra e interensayo respectivamente. El método estandarizado aplicado a la medición de 17B E2 en muestras de saliva de mujeres normales eumenorréicas a lo largo del ciclo menstrual, mostró valores de 400-970 pg/ml en el día del pico preovulatorio con una M + DE de 672 + - 290 pg/ml; durante la fase lútea la concentración fue menor (50-450 pg/ml). En cuanto a líquido biológico podemos señalar que la saliva es uno de los fluídos más accesibles del cuerpo humano, fácil de procesar, y una excelente alternativa para las muestras de sangre, con algunas ventajas respecto a su valor diagnóstico, ya que se pueden tomar muestras diarias. El método inmunoenzimático no requiere de radioisótopos y por sus características similars al radioinmu