Padronizacao da metodologia para determinacao das fracoes da hidroxiprolina urinaria. / Method for the urinary hydroxyproline fractions determination

RESUMO

Foram realizados estudos referentes as varias fases do metodo proposto por Bergman et al para dosagem das formas urinarias da hidroxiprolina. Os testes de linearidade da reacao e curva de absorcao foram realizados em varios aparelhos fotometricos tendo sido observado entre eles a concordancia dos seguintes resultados: absorcao maxima da solucao colorida em 562 nm e obediencia da reacao a Lei de Lambert-Beer ate a concentracao de hidroxiprolina de 8,1 ug/ml. A solucao padrao do aminoacido foi mostrada como sendo bastante estavel quando dissolvida em HCI 1 mM e mantida em congelador. Para a hidrolise da fracao ligada a peptideos o HCI 6 N possibilitou maior economia de hidroxido de litio e melhor visualizacao do ponto de viragem do que o HCI 12 N. A proporcao 12 para acido urina permitiu hidrolise completa em 24 horas em estufa a 110 graus C. O estudo de recuperacao de quantidades variaveis de hidroxiprolina acrescidas a diferentes amostras de urinas de rato ou humanas apresentou valores variando de 95,6% ate 97,4% e de 70,6% ate 81,8% respectivamente para as fracoes total e livre na urina humana.Para a hidroxiprolina total e de 78,0% a 82,9% para a fracao livre