Investigación de péptidos plasmáticos en la insuficiencia renal crónica / Investigation of plasma peptides in chronic renal failure

RESUMEN

Se describe una metodología para el fraccionamiento de péptidos y se aplica, en el presente trabajo, al análisis de compuestos péptidos presentes en el plasma de pacientes con insuficiencia renal crónica (IRC). Las muestras de plasma de sujetos controles (C;n=5) y de pacientes con IRC (n-10) fueron ultrafiltradas a través de membranas Diaflo PM 30 e YM 02, obteniéndose 2 fracciones, fracción A con sustancias de masa molecular relativa (M) menor de 1.000 y fracción B con M, aproximada entre 1.000 y 30.000, aunque los ensayos de estandarización mostraron que esta última fracción incluía proteínas de M, semejante a la albúmina. Las fracciones A, estudiadas mediante cromatografía en capa fina, mostraron la presencia de una banda fluorescamina positiva en las muestras de IRC, ausente en las C. Las fracciones B fueron analizadas por electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE) y tranferencia con detección inmunológica. Para desarrollar esta última técnica, se obtuvo un antisuero en conejo contra la fracción plasmática B, obtenida a partir de un pool de plasmas de pacientes con IRC. Después de la separación en SDS-PAGE, los compuestos fueron transferidos a papel de nitrocelulosa y detectados mediante una técnica de doble antisuero, empleando como primer antisuero, el anti-fracción IRC obtenido en conejo y luego, un antisuero inti-IgG de conejo, marcado con peroxidasa. Para el revelado final se utilizó una reacción colorimétrica, mediada por peroxidasa. El análisis de SDS-PAGE mostró que las fracciones plasmáticas B de pacientes con IRC contenían mayor número de bandas en el rango de M, 15.000-70.000 que las C, aumentando las diferencias cuali y/o cuantitativas entre los dos grupos, al emplear la técnica de separación electroforética, tranferencia de detección inmunológica. El procedimiento descrito constituye una metodología apropiada para el estudio de péptidos en líquidos biológicos