Evaluación de metodologías del ADN recombinante para diagnóstico de P. falciparum, en comparación con los examenes microscópico / Evaluation of DNA recombinant methodologics for the diagnostic of plasmodium falciparum and their comparatien with the microscopic assays

RESUMEN

Desde 1984, se ha reportado el uso diagnóstico con una alta sensibilidad de una secuencia altamente repetitiva de 21 pb específica para P. falciparum. Considerando la organización genómica de esta secuencia, que se encuentra en repetidos de 21 pb en tanda, en regiones sub-teloméricas con bloques invertidos, ha sido diseñado un ensayo de PCR (I) Pf-21, con un oligonucleótido único, altamente sensible y específico, acoplado a una hibridación y revelado por métodos no radiactivos para la detección de P. falciparum, en muestras de sangre de pacientes de Tumerebo-Bolívar y en ADN purificado de diferentes aislados provenientes de Brasil y Colombia. Con este sistema de PCR y la optimización de un protocolo para el tratamiento de la muestra utilizando Chelex-100-iron, se ha podido diagnósticar, correctamente P. falciparum. Cuando el ensayo fue comparado con el diagnóstico de gota gruesa y extendido coloreado com Giemsa, se mejoró la sensibilidad del método tradicional en una r=2,71 y sobre infecciones mixtas en una r=51. Esta aproximación además de proporcionar una alternativa al diagnóstico epidemiológico de P. falciparum, ha permitido obtener patrones de fragmentos amplificados distintos, para aislados de diferente origen geográfico. Estos resultados constituyen una importante herramienta en la epidemiología de la malaria, ya que permitirá masificar el diagnóstico y hacer un reconocimiento de las distintas cepas circulantes en las áreas endémicas venezolanas