Producao e controle de qualidade do anticorpo monoclonal anti-CD3 para uso terapeutico / Production and quality control of the monoclonal antibody anti-CD3 for terapeutic use

RESUMO

Nos ultimos anos, tem sido cada vez maior o interesse por proteinas, peptideos e outras substancias de uso medicinal derivadas das tecnologias do ADN recombinante e dos hibridomas. No presente trabalho sao descritos tres processos de producao de anticorpo monoclonal (AcM) anti-CD3 para uso na reversao de rejeicao de transplante de orgaos, em biorreator do tipo airlift adaptado para funcionar como leito empacotado. Para isso, a dorna de 3L foi preenchida com cilindros de vidro, criando uma area de 10.000 centimetros cubicos para a deposicao das celulas. Para os dois primeiros cultivos de 30(I) e 21 dias (II) foi utilizado meio de cultura suplementado com soro fetal bovino (FCS). O terceiro cultivo foi dividido em duas etapas. Na primeira etapa, que durou 36 dias (III-1) foi utilizado meio livre de soro e na segunda etapa com duracao de 53 dias(III-2), meio suplementado com soro de potro. A concentracao dos sobrenadantes foi feita por ultrafiltracao tangencial ou cromatografia de troca-ionica seguida de purificacao por cromatografia de afinidade em coluna de proteina A-Sepharose, no caso dos processos em que o meio de cultura foi suplementado por soro. Os rendimentos de AcM total foram de 3,15g, 2,10g, 5,30g e 23,2g para os Processos I, II, III-1 e III-2, respectivamente. Os produtos obtidos cumpriram as exigencias para os testes preconizados para soros de origem animal, bem como para AcMs de origem murina para uso clinico, exceto no que refere ao teor de ADN residual/dose. O biorreator airlift configurado como leito empacotado mostrou ser uma boa alternativa para o cultivo de hibridomas de longa duracao, tendo sido alcancada alta densidade celular com a inclusao dos cilindros de vidro. O meio livre de soro foi a melhor opcao quando comparado ao meio suplementado com FCS ou soro de potro, por permitir a purificacao de sobrenadantes em uma unica etapa de cromatografia de troca-ionica, alem de evitar a eventual introducao de agentes adventicios de origem animal