Diagnóstico inmunohistoquímico del dengue en cortes de parafina / Immunohistochemical diagnostic of dengue in paraffin sections

RESUMEN

La demostración de antígenos de los virus del dengue en tejidos de pacientes fallecidos por dengue hemorrágico y particularmente en aquellos casos en los que no se dispone de otras pruebas para confirmar la etiología viral, es una necesidad frecuente en nuestro medio. Por esta razón, estandarizamos una técnica inmunohistoquímica para detectar antígenos de dengue en tejidos incluidos en parafina. Utilizamos anticuerpos antiflavivirus comúnmente usados para el diagnóstico serológico. Los antígenos empleados para estandarizar esta técnica incluyeron 1) cerebros de ratón inoculados con los diferentes serotipos del dengue y con virus de la fiebre amarilla; 2) cortes de hígados de pacientes fallecidos con diagnóstico clínico de dengue hemorrágico, fiebre amarilla o hepatitis delta; y 3) monocapas de células C6/36 inoculadas también con los diferentes serotipos del dengue. Estos antígenos se enfrentaron a los anticuerpos antiflavivirus (fiebre amarilla o dengue) preparados como líquidos ascíticos inmunes (LAI) de ratón, siguiendo procedimientos ya establecidos. Utilizamos LAI preparados en el INS y LAI suministrados por la OPS. La dilución ideal de trabajo con la cual pudimos observar la presencia del antígeno, tanto en los tejidos como en las células, se obtuvo titulando los distintos LAI frente a cortes de tejido desparafinado o frente a las células fijadas en etanol sobre la lámina de vidrio. Con los LAI preparados en el INS, observamos reacción cruzada entre todos los flavivirus, resultado que no se observó en los cortes de hígado con diagnóstico de hepatitis delta. Los resultados obtenidos con los LAI de la OPS permitieron visualizar los antígenos virales más claramente y a diluciones más altas, sin la reacción cruzada entre el dengue y la fiebre amarilla. Sin embargo, la visualización de los mismos con los LAI del INS es satisfactoria y con disponibilidad permanente. La reacción cruzada entre los virus del dengue y de la fiebre amarilla no es un problema mayor en el tejido porque la histopatología de las dos entidaes en el hígado, es muy diferente