Cultivo de queratinocitos humanos in vitro / In vitro human keratinocytes cultured

RESUMEN

La técnica de cultivo de queratinocitos puede considerarse como un arma irreemplazable y una alternativa confiable para ser aplicada a pacientes con daño parcial o externo de su piel que ameriten sus propias células especializadas para su recuperación. El objetivo de este estudio fue desarrollar una metodología propia para obtener monocapas de epidermis, para lo cual se obtuvieron muestras de piel procedentes de 7 pacientes sometidos a diferentes procedimientos de cirugía estética. Mediante la dispasa tipo II (2,4 unid/ml) se logró una excelente separación de la epidermis de la dermis al obtener una lámina de epidermis libre de fibroblastos, evidenciado además en los cultivos primarios de las células epidermales, donde se observó el crecimiento celular de los queratinocitos libres de células dérmicas, cuando se cultivaron en el substrato de colágeno tipo I obtenido partir de cola de la rata. En los subcultivos se hizo una comparación de diferentes subtratos-plásticos, fibroblastos inhibidos con mitomicina C (4 Mg/ml), substratos de colágeno y se observó un comportamiento similar de agregación y formación de monocapas entre 8-14 días de cultivo, a excepción de los queratinocitos subcultivos sobre plástico donde las células degeneraron en un tiempo corto. También se analizaron subcultivos en presencia de geles de colágeno tipo I con medios condicionados y se apreció una mayor velocidad de crecimiento en los queratinocitos al igual que cuando se utilizaron fibroblastos inactivados. La obtención de monocapas de células epidermicas se logró entre los 27 y 35 dias después de haberse iniciado el cultivo, mediante hormona de crecimiento a una concentración de 2 Mg/ml; se demostró diferenciación y estratificación de las monocapas de queratinocitos obtenidas in vitro