Determinación y caracterización de antígenos de cisticercus de T. solium, reconocidos por líquidos cefalorraquídeos de pacientes con neurocisticercosis / Determination and characterization of T. solium cysticercus antigens, recognized by cerebrospinal fluid from neurocysticercosis patients

RESUMEN

La cisticercosis humana es una parasitosis causada por T. solium la cual posee una alta prevalencia en aíses en desarrollo constituyéndose en un problema de salud pública, y en donde la neurocisticosis (NCC) es su forma más grave ya que compromete el sistema nervioso central (SNC). Debido a que las técnicas desarrolladas para el inmunodiagnóstico de NCC presentan problemas de sensibilidad y especificidad, en éste estudio se desarrollo un método analítico sensible para la identificación de antígenos específicos de cisticerco de T. solium reconocidos por líquidos cefalorraquídeos (LCRs) de pacientes con (NCC). La identificación de un número definido de antígenos de T. solium potenciales para el inmunodiagnóstico permitiría posteriormente la purificación de proteínas para el desarrollo de técnicas inmunodiagnósticas. Los antígenos presentes en LIV de cisticerco, fueron modificados químicamente empleando Biotina-NHS (Biotin-Amido-Caproato-N-hidroxisuccinimida éster) seguido por una inmunoprecipitación utiliando LCR. Los complejos antígeno-anticuerpo fueron capturados empleando agarosa anti IgG humana y posteriormente, las proteínas resueltas por electroforesis, seguida de transferencia a papel de nitrocelulosa. Los antígenos biotinilados, fueron reconocidos utilizando estreptavidina conjugada a fosfatasa alcalina y la reacción se visualizó empleando el sustrato NBT (nitro blue tetrazolium) y BCIP (4-cloro-5-bromo-4cloro-3-indolyl phospahate) (Sigma). Se identificaron 5 polipeptidos principales de 100 kDa, 70 kDa, 50 kDa, 35 kDa y 24 kDa por el ensayo de inmunoprecipitación. Los polipéptidos de 100 kDa, 50 kDa y 24 kDa dueron reconocidos por LCRs de pacientes clínica y serológicamente positivos por ELISA para NCC (94 por ciento, 94 por ciento y 78 por ciento respectivamente), además éstos antígenos fueron reconocidos por LCRs de pacientes con otras neuropatologías de SNC (94 por ciento, 76 por ciento y 47 por ciento respectivamente) e igualmente por LCRs de pacientes sospechosos clínicamente pero serológicamente negativos por ELISA para NCC (21 por ciento, 24 por ciento, y 13 por ciento respectivamente). Los antígenos de 70 kDa fueron reconocidos por el 86 por ciento y 90 por ciento respectivamente, de los LCRs de pacientes clínica y serológicamente positivos por ELISA para NCC. Estos antígenos no fueron reconocidos por LCRs de pacientes con otras neuropatologías del SNC. Sin embargo,...