Detección de antígeno de cepas colombianas de Giardia lamblia en eluidos de heces humanas utilizando anticuerpos policlonales anti-31, 65 y 170 kDa específicos del parásito mediante ELISA / Detection of Giardia lamblia Colombian strain antigens in eluates from human faeces using the specific anti-31, 65 and 170 kDa especific parasitic policlonal antibodies by ELISA

RESUMEN

La giardiosis es una enfermedad intestinal causada por el protozoo, flagelado, Giardia el cual se encuentra a nivel mundial, en países desarrollados y en vías de desarrollo. Este tiene un cilo de vida simple con un quiste infectante y un trofozoíto vegetativo. La identificación del parásito se realiza por el análisis parasitológico generalmente en materia fecal y coprológicos seriados, líquido duodenal y biopsia intestinal. Actualmente, la detección de Giardia está basada en el desarrollo de anticuerpos policlonales y/o monoclonales anti-Giardia. La detección de antígeno de Giardia en eluídos de heces humanas utilizando anticuerpos específicos de pesos moleculares de 30 y 65 kDa se ha realizado mediante el uso de estuches inmunodiagnósticos. La presente investigación se propuso estandarizar y evaluar un ELISA "sandwich" directo utilizando una mezcla de tres anticuerpos policlonales desarrollados contra 31, 65 y 170 kDa de trofozoíto de Giardia para la captura de antígeno del parásito en eluídos de heces humanas. Los antígenos de 31, 65 y 170 kDa del parásito se obtuvieron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) y se desarrollaron, en conejo, anticuerpos policlonales anti-31, 65 y 170 kDa. Estos fueron purificados mediante precipitación secuencial con ácido caprílico y sulfato de amonio y se elaboró un conjugado con parte de los anticuerpos policlonales uniéndole a éstos la enzima fosfatasa alcalina. Se realizó una mezcla de anti-31, 65 y 170 kDa en proporción 111 respectivamente. Se estandarizó y evaluó el ELISA para la detección del antígeno de Giardia en eluídos de heces humanas. La concentración óptima de anticuerpos policlonales fue de 40 µg/ml y la de conjugado de 1300. El valor de absorbancia (punto de corte) que diferenció una muestra negativa de una positiva fue 0.36. Los parámetros de la prueba fueron sensibilidad 72 por ciento, especificidad 81 por ciento, valor predictivo positivo 68 por ciento y valor predictivo negativo 84 por ciento. Los anticuerpos policlonales monoespecíficos desarrrollados contra las proteínas antigénicas de 31, 65 y 170 kDa de trofozoíto de Giardia fueron específicos para las proteínas obtenidas después del proceso electroforético SDS-PAGE.La ELISA del estudio ofrece una sensibilidad del 72 por ciento que es igual a la obtenida con el diagnóstico parasitológico de una muestra de materia fecal. Sería importante evaluar la sensiblidad del ELISA...