Validaçäo de abordagens moleculares para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana em Pernambuco / Validation of molecular for the diagnosis of the leishmaniasis diffuse cutaneous in Pernambuco

RESUMO

O controle da leishmaniose depende da disponibilidade de métodos acurados e sensíveis para detecçäo das espécies de Leishmania. Duas abordagens moleculares foram avaliadas para o diagnóstico de leishmaniose tegumentar americana (LTA) em pacientes provenientes de zonas endêmicas de Pernambuco. Uma delas era gênero específica, enquanto que a outra era específica para o subgênero Viannia. Os limiares de detecçäo de DNA foram determinados e a sensibilidade e especificidade calculadas, sendo subsequentemente comparadas com outros testes diagnósticos mais convencionais. O limiar de detecçäo de DNA da PCR específica para o subgênero Viannia foi de 10 fg de DNA total, enquanto que o limiar de detecçäo para a PCR gênero específica foi de 1 pg de DNA total. Para a definiçäo de caso de LTA adotou-se a presença de critérios clínico-epidemiológicos, associados à positividade em pelo menos um dos seguintes testes pesquisa direta, exame histopatológico e isolamento por cultura. Dessa forma dos 98 pacientes inicialmente diagnosticados com base puramente clínico-epidemiológica, 87 foram considerados casos de LTA, e utilizados para o cálculo da sensibilidade. Trinta e um pacientes com lesöes cutâneas de outras etiologias foram incluídos como controles para o cálculo da especificidade. A PCR gênero específica foi positiva em 60/67 das biópsias de LTA, resultando em uma sensibilidade de 89,6 por cento, enquanto que a PCR específica para o subgênero Viannia foi positiva em biópsias de 82/87 casos de LTA, resultando em uma sensibilidade de 94,3 por cento. Contudo, essas diferenças näo foram significantes. Esse dado associado a outros, sugere que apenas o subgênero Viannia tem participaçäo como agente etiológico de LTA em Pernambuco. Ambas as PCRs demonstraram 100 por cento de especificidade. O diagnóstico através da pesquisa direta apresentou um percentual de positividade dentre os casos de LTA de 68,2 por cento, o exame histopatológico 89,9 porcento, o isolamento através de cultura 44,0 por cento e a imunofluorescência indireta 81,3 por cento. Visando a utilizaçäo em regiöes endêmicas com poucos recursos foram realizados alguns experimentos preliminares bem sucedidos com PCR/hibridizaçäo com sondas näo radioativas. Em conclusäo, as abordagens moleculares avaliadas mostraram alta sensibilidade e especificidade, permitindo uma delas o diagnóstico ao nível do subgênero Vianna.