Estudo da expressäo de proteínas pró-apoptóticas e anti-apoptóticas antes e após cultura com fludarabina em células de leucemia linfocítica crônica / Expression od apoptosis-regulating proteins before and after cell culture with fludarabine in chronic lymphocytic leukemia

RESUMO

A leucemia linfóide crônica (LLC), é neoplasia clonal de células B, caracteristicamente de evoluçao insidiosa, onde o acúmulo de linfócitos ocorre nao pelo índice de proliferaçao acentuado, mas pela inibiçao da apoptose. Objetivos: Averiguar as proteínas determinantes da apoptose p53; bcl-2; bax; bag-1 e mcl-1 em linfócitos de portadores de LLC In natura", e após incubaçao com fludarabina e correlacionar a expressao destas proteínas com o grau de apoptose; com o estadiamento clínico de Rai modificado, o tempo de duplicaçao linfocitária (TDL) e a presença ou ausência de tratamento prévio. Métodos: Antes e após incubaçao com fludarabina por 48 horas foram determinadas por citometria de fluxo, as expressoes das proteínas p53, bcl-2, bax, bag-1, mcl-1 e anexina em células linfomononucleares separadas por gradiente de densidade. As subpopulaçoes viável e apoptótica foram identificadas à citometria através do tamanho, complexidade e co-expressao de CD5 e CD20. O grau de apoptose nas 2 subpopulaçoes foi confirmado pela expressao da anexina. Foi feita análise de variância da expressao das proteínas entre o sistema de estadiamento de Rai modificado, o tempo de duplicaçao linfocitária e a presença ou ausência de tratamento prévio nas 2 subpopulaçoes. Foi feita análise de correlaçao entre as expressoes das proteínas e a expressao da anexina. Foram utilizados os testes de Mauchly, a "ANOVA one way" e o coeficiente de Pearson para as análises estatísticas. Resultados e Conclusoes: A divisao da populaçao linfocitária em subpopulaçoes viável e apoptótica à citometria de fluxo, forneceu subsídios importantes no estudo do comportamento das proteínas, tais como 1) A proteína p53 foi regulada positivamente após exposiçao à fludarabina; 2) A proteína bax foi importante indutora de apoptose na subpopulaçao responsiva à fludarabina; 3) A proteína bcl-2 apresentou açao anti-apoptótica na LLC, mas o índice bcl/bax refletiu melhor o comportamento celular na apoptose, por considerar também a influência da bax; 4) A proteína mcl-1 apresentou-se aumentada entre as células resistentes à incubaçao com fludarabina e pode ser uma das responsáveis pela inibiçao da apoptose na LLC; 5) A proteína bag-1 apresentou alta expressao na subpopulaçao de células viáveis na LLC, e foi a que mais se relacionou com a persistência da viabilidade celular após incubaçao com fludarabina;...(au)