Desarrollo y aplicación de una prueba RCP para detectar la infección subclínica por mycobacterium leprae / Developing and using a PCR test to detect subclinical Mycobacterium leprae infection

ABSTRACT

Objective. While the prevalence of leprosy has declined around the world, there has not been a corresponding decrease in its incidence, thus indicating that it has not been possible to prevent transmission of the disease. Despite the small number of patients with lepromatous leprosy, the majority of the inhabitants of endemic areas show signs of exposure to Mycobacterium leprae, which could be explained by the presence of subclinical bacilliferous infections in the community. The objective of this study was to investigate the use of a polymerase chain reaction (PCR) test to detect M. leprae in samples of nasal mucus from asymptomatic household contacts of patients with leprosy. Methods. We standardized and optimized a PCR technique to amplify a 321 base pair DNA fragment, using a pair of primers complementary to a segment of an LSR/ A15 gene that codes for the 15 kDa M. leprae antigen. We investigated the optimal concentrations of all the test components. We used dimethyl sulfoxide (DMSO) to achieve a more specific amplification. We applied the PCR test to 70 healthy household contacts of leprosy patients from eight municipalities in Colombia where there was a high prevalence of the disease. Results. The test's detection limit was 100 fg of DNA. With the optimized technique, bacillus was detected in the nasal mucus samples of 9 (12.8%) of the 70 household contacts. The 3 PCR-positive household contacts of paucibacillary cases were from municipalities with very high prevalence levels. In comparison to contacts who were PCR-negative, the contacts who were PCR-positive had spent significantly less time, as a proportion of their age, living with a patient (P = 0.028). This finding demonstrates the test's capacity for early detection. Conclusions. The PCR test that we developed is useful as a tool for detection and early follow-up of possible leprosy cases. It can be used to monitor high-risk populations and also to maintain the achievements of leprosy elimination programs in countries where the disease's prevalence has been significantly reduced

RESUMEN

Objetivos. El descenso mundial de la prevalencia de la lepra no ha coincidido con un descenso de su incidencia, lo cual indica que no se ha podido prevenir la transmisión de la enfermedad. A pesar de la escasez de pacientes con lepra lepromatosa, la mayoría de los habitantes de áreas endémicas presentan signos de exposición al Mycobacterium leprae, hecho que podría explicarse por la presencia de infecciones subclínicas bacilíferas en la comunidad. El objetivo de este estudio consistió en investigar el uso de una prueba de reacción en cadena de la polimerasa (RCP) para detectar M. leprae en muestras de moco nasal de contactos intradomiciliarios, sin signos ni síntomas, de pacientes con lepra. Métodos. Se estandarizó y optimizó una técnica de RCP para amplificar un fragmento de 321 pares de bases, utilizando un par de iniciadores complementarios a un segmento del gen LSR/A15 que codifica la proteína de 15 kDa. Se investigaron las concentraciones óptimas de todos los componentes y se utilizó dimetilsulfóxido (DMSO) para lograr una amplificación más específica. La prueba se aplicó a 70 contactos intradomiciliarios de pacientes procedentes de ocho municipios colombianos con alta prevalencia de lepra. Resultados. El límite de detección de la prueba fue de 100 fg de ADN. Con la técnica optimizada se detectó la presencia del bacilo en las muestras de moco nasal de 9 (12,8%) de los 70 contactos intradomiciliarios sanos. Todos los contactos intradomiciliarios de casos paucibacilares que resultaron positivos (n = 3) procedían de municipios con una prevalencia muy alta. La convivencia de los contactos RCP+ con los pacientes, expresada como tiempo de convivencia en relación con la edad fue significativamente menor que la de los contactos con resultados negativos en la RCP (P = 0,028), demostrando la capacidad de detección precoz de la prueba. Conclusiones. La RCP desarrollada es útil como herramienta de detección y seguimiento precoz de posibles casos de lepra y se puede utilizar en la monitorización de poblaciones de alto riesgo y también para el mantenimiento de los logros del programa de eliminación de la lepra en países donde se ha conseguido reducir significativamente su prevalencia