Padronização e aplicação de uma metodologia para determinação do polimorfismo da enzima ácido &-aminolevulínico desidratase na avaliação da exposição ao chumbo / Standardiztion and application of a methodology for determination of the polymorphism enzymes aminolevulinic acid hycholyases in the evaluation the lead exposure

RESUMO

Teve como objetivo padronizar uma metodologia para investigação do polimorfismo, que possa ser utilizada em estudos de exposição ao chumbo. Foram padronizados métodos para extração de DNA, amplificação, purificação e digestão enzimática. Após padronizada, a metodologia foi aplicada em uma amostra populacional de 50 indivíduos (...).Ficou estabelecida a seguinte metodologia para genotipagem da ALAD: extração de DNA a partir de 1 mL de sangue total, utilizando o kit GFX Genomic Blood DNA Purification; amplificação por PCR, com o kit Ready-To-Go PCR Beads e os primers 5Æ-AGACAGACATTAGCTCAGTA-3Æ (senso) e 5Æ-GGCAAAGACCACGTCCATTC-3Æ (antisenso); purificação com o kit GFX PCR DNA/GEL Band Purification; e digestão do produto com Msp I (7,5 unidades para 1, 5 g). A metodologia se mostrou eficiente, específica e sensível para determinação do genótipo da ALAD da população, onde 98 por cento apresentou genótipo ALAD1-1 e 2 por cento, ALAD1-2. Os indicadores apresentaram níveis médios de 4,2 g/dL(não expostos) e 70,7 (expostos) para chumbo em sangue; 38,1 por cento (não expostos) e 67,2 por cento (expostos) para recuperação da ALAD; 2,4 moles/g Hb (não expostos) e 30,3 moles/g Hb (expostos) para zinco protoporfirina eritrocitária; e 0,75 mg/g Cr (não expostos) e 13,66 mg/g Cr (expostos) para ácido -aminolevulínico urinário. A metodologia para genotipagem da ALAD padronizada pode ser aplicada para determinação do polimorfismo da enzima em estudos de exposição ao chumbo.