Seleção de linhagens fúngicas produtoras de L-asparaginase: efeito da fonte de nitrogênio na produção da enzima por Aspergillus tamarii IOC 186 e Aspergillus terreus IOC 217 / Selection of producing fungi strain of L-asparaginase: effect of the nitrogen source in the production of the enzyme for Aspergillus 186 tamarii terreus IOC and Aspergillus IOC 217

RESUMO

O presente trabalho objetivou selecionar fungos filamentosos da Coleção de Fungos do Instituto Oswaldo Cruz /FIOCRUZ, preservados sob óleo mineral, potencialmente produtores de L- asparaginase. A L- asparaginase (EC. 3.5.1.1) é a única enzima utilizada no tratamento de eficiência da leucemia linfoblástica, sendo, portanto de grande importância terapêutica. A enzima comercial é produzida por linhagens recombinantes de bactérias como Eschericchia coli e Erwinia chrysanthemi. Apesar de sua efetividade o medicamento provoca efeitos colaterais que poderiam ser minimizados com o uso da enzima produzida por um microrganismo eucarioto. Foram inicialmente estudadas de vinte e seis linhagens dos gêneros Aspergillus, Penicillium e Fusarium em cultivos em placas de Petri, de acordo com a sua capacidade de desaminar a asparagina presente no meio e subseqüentemente as linhagens selecionadas, Aspergillus tamarii IOC 186 e Aspergillus terreus IOC 217, foram cultivadas em fermentações submersas utilizando meios de crescimentos contendo asparagina, glutamina, prolina e uréia como fontes únicas de nitrogênio. A escolha das fontes de nitrogênio levou em conta a possibilidade da asparaginase fúngica ser regulada por nitrogênio. As fermentações foram acompanhadas em relação ao consumo de glicose, crescimento celular, produção da enzima e variação de pH. Os resultados obtidos demonstraram que as linhagens selecionadas apresentaram maiores níveis de atividade enzimática quando cultivadas em meio contendo prolina 2 por cento(v/v), fonte de nitrogênio. As linhagens Aspergillus terreus e Aspergillus tamarii apresentaram maiores níveis de L-asparaginase após 48 horas de cultivo, com 60U/L e 38U/L, respectivamente. Estes resultados demonstraram que a asparaginase fúngica extracelular é regulada por nitrogênio e que os fungos filamentosos podem ser uma boa fonte da enzima. Como neste estudo foram utilizadas linhagens estocadas sob óleo mineral e preservadaa viabilidade e estabilidade genética das linhagens em questão demonstram a efetividade dos procedimentos de conservação adotados na Coleção de Fungos do IOC.