Trypanosoma cruzi: solubilización y caracterización parcial de componentes antigénicos con Triton X-100 / Trypanosoma cruzi: solubilization and parcial characterization of antigenic components with Triton X-100

RESUMEN

Con el objeto de aislar una fracción antigénica de Trypanosoma cruzi, más sensible para el diagnóstico de la enfermedad de chagas que las utilizadas tradicionalmente, los parásitos fueron sometidos a un proceso de solubilización parcial con Tritón X-100. La metodología involucró 1) Recolección de epimastites cultivados en LIT modificado al comienzo de la fase estacionaria (aproximadamente 200 x 10**6 células/ml, pH 7). 2) Lavado y posterior resuspensión de las células e un medio salino libre de proteínas, 470 mOsmolar (osmolaridad 25% menor que la del medio de cultivo). 3) Acción del Tritón X-100 sobre las células a muy baja concentración (162 micronM), durante 1 h, a 4-C. Previa determinación de la relación óptima de las concentraciones de células (300 X 10**6 cél/ml) y de Tritón X-100, se constató que los parásitos liberaban al medio una cantidad aproximadamente constante de proteínas (0,42 a 0,44 mg/ml), conservando, durante todo el proceso de extracción, su movilidad y viabilidad. El método resultó sencillo, rápido y reproducible. La fracción extraída por este método (F1) fue evaluada frente a suero de 17 pacientes infectados con T. cruzi mediante las técnicas de fijación de complemento (FC'H 50) y hemaglutinación indirecta (HAI). El antígeno preparado en el Instituto de Medicina Tropical, M(PM), fue utilizado como referencia. F1 resultó ser entre cuatro y ocho veces más sensible que M(PM) por la técnica de FC'H 50; utilizando la HAI, su sensibilidad fue ocho veces mayor que la de la fracción antigénica patrón. Su análisis inmunoelectroforético evidenció que por lo menos posee cinco componentes proteicos