Viabilidade e fertilização in vitro de oócitos bovinos após vitrificação / Viability and in vitro fertilization of bovine oocytes after vitrification

RESUMO

OBJETIVOS: avaliar a técnica de criopreservaçäo por vitrificaçäo em DMSO 6 M para oócitos bovinos maturados in vitro e os efeitos do tempo de exposiçäo às soluçöes de vitrificaçäo (SV). MÉTODOS: estudo experimental tipo coorte. Ovários de bovinos foram obtidos em frigorífico e transportados ao laboratório. Os oócitos foram aspirados. A partir da SV contendo DMSO 6 M (SV 100 por cento), foram preparadas soluçöes a 25 e 65 por cento. Oócitos foram maturados in vitro por 18-22 horas. Para vitrificaçäo, os oócitos foram colocados em SV 25 por cento, por 5 minutos, transferidos à SV 65 por cento, pipetados em SV 100 por cento para palhetas e estocados em nitrogênio líquido. No primeiro grupo experimental, a exposiçäo à SV 65 por cento tomou até 60 segundos e no segundo grupo näo ultrapassou 30 segundos. Para descongelamento, as palhetas foram expostas ao ar por 10 segundos, colocadas em banho-maria por 10 segundos e seu conteúdo expelido e mantido em soluçäo de sacarose por 5 minutos. No terceiro grupo, os oócitos passaram por todas SV menos pelo nitrogênio líquido. Os oócitos recuperados foram inseminados. Para controle, oócitos frescos, maturados in vitro, foram inseminados. RESULTADOS: após vitrificaçäo, foram recuperados 69,1 e 59,8 por cento dos oócitos nos grupos de 30 segundos e 60 segundos, respectivamente, e 24 horas após inseminaçäo pareceram morfologicamente normais 93 e 89,1 por cento deles, respectivamente. No grupo de oócitos expostos às SV sem vitrificaçäo, foram recuperados 75,6 por cento, sendo 84,6 por cento destes viáveis 24 horas após inseminaçäo. Näo ocorreu fertilizaçäo nos grupos experimentais. Entre os controles frescos, foram fertilizados 65,4 por cento dos oócitos. CONCLUSÖES: a técnica de vitrificaçäo utilizando DMSO 6 M näo é aplicável para criopreservaçäo de oócitos bovinos maturados in vitro. A reduçäo do tempo de exposiçäo às SV näo superou o efeito deletério sobre a capacidade fertilizadora dos oócitos. Aprimoramentos da técnica säo necessários para proteçäo da zona pelúcida e do oolema