Caracterização e identificação de uma proteina secretada no sobrenadante de culturas celulares infectadas por toxoplasma gondii / Characterization and identification of a secreted protein in the swimming of infected cultures cellular for toxoplasma gondii

RESUMO

A toxoplasmose é uma infecção causada por um protozoário com ampla propagação na natureza. É uma zoonose de felídeos com características próprias, na qual o parasita, Toxoplasma gondii, infecta células nucleadas de vários animais na escala zoológica. No Brasil a incidência é alta em várias regiões do país e acomete indivíduos de todas as esferas sociais. As lesões mais sérias são encontradas em mulheres que adquiriram a infecção durante o período de gestação, pessoas que sofrem de algum tipo de imunossupressão ou imunocompetentes que tiveram a infecção mal diagnosticada e não receberam tratamento adequado. Durante o estabelecimento da doença, diferentes processos acontecem no hospedeiro em resposta à entrada dos parasitas nas células. As proteínas produzidas pelo parasita são responsáveis por vários fenômenos envolvendo interações entre os organismos. Elas participam dos mecanismos de escape do sistema imune e estabelecem condições de permanência do parasita na célula. O presente estudo teve como objetivo analisar proteínas de Toxoplasma gondii liberadas no sobrenadante de culturas de células infectadas, identificá-las e avaliar sua capacidade imunogênica. Foram utilizados taquizoítos para infectar células VERO. Os sobrenadantes resultantes das culturas foram retirados em diferentes tempos após a infecção, filtrados e concentrados. A análise por SDS-PAGE mostrou a presença de uma proteína majoritária com massa molecular de cerca de 70 kDa. Pelas análises realizadas neste estudo, acreditamos que esta proteína é liberada no momento em que o parasita penetra na célula hospedeira. O concentrado protéico foi purificado por cromatografia de troca iônica e, com a proteína de 70 kDa purificada, determinamos os primeiros 20 aminoácidos da região N-terminal. A seqüência é inédita pois quando foi comparada com as já descritas na literatura não foi observada nenhuma homologia. Soros de indivíduos portadores de toxoplasmose apresentam alta reatividade contra a proteína. Ela mostrou-se também altamente específica para T. gondii, pois soros de indivíduos saudáveis ou de outras infecções não foram reativos para protéina em ELISA e "Immunoblot". Anticorpos de camundongos imunizados com a proteína reconheceram especificamente em "Immunoblot", lisado bruto de taquizoítos. Estes dados sugerem que a proteína de cerca de 70 kDa participa do processo entrada dos taquizoítos na célula hospedeira e desencadeia uma resposta imune importante. Contudo, mais estudos devem ser...