Establecimiento de un método para la transformación genética de café (coffea arabica cv. catimor) e incorporación del gen bar que confiere resistencia al herbicida glufosinato de amonio / Establisment of a genetic transformation method of coffee (coffea arabica cv. catimor) and incorporation of bar gene for ammonium

RESUMEN

Con el fin de establecer un método de transformación genética para Coffea arabica cv. Catimor, se evaluaron las condiciones óptimas de regeneración y transformación por electroporación en diferentes tejidos de la planta. Se optimizó el sistema de células en suspención, utilizando una sola hormona (BA), obteniéndose altos rendimientos de embriones somáticos primarios y secundarios. Igualmente se estableció el método del MTT (1 por ciento) y las dosis de glufosinato de amomio para la selección de células viables y células potencialmente transformadas (1 mg/L para hoja, callo y embriones somáticos y 5 mg/L para células) respectivamente. Se electroporaron distintos tejidos (calo embriogénico, hojas de vitroplantas, embriones globulares y torpedo), con distintas condiciones, encontrándose el mayor porcentaje de expresión transitoria del gen gus por explante, en tejidos pre-tratados enzimáticamente, a 375 V/cm en callos, y 625 V/cm en hojas y embriones. Los únicos tejidos electroporados que regeneraron plantas, fueron las secciones de embriones somáticos tipo torpedo cultivados en medio líquido, que dieron orígen a embriones somáticos secundarios. Dichos embriones somáticos resultaron positivos en el ensayo histoquímico para el gen gus y en la reacción de PCR para los genes gus y bar