Diferenciação molecular de moluscos do gênero Lymnaea (Gastropoda, Lymnaeidae) utilizando a PCR-RFLP e o estudo da variabilidade genética de L. columella pela RAPD / Molecular differentiation of molluscs of the Lymnaea genus (Gastropoda: Lymnaeidae) assessed by PCR-RFLP and analysis of the genetic variability of L. columella by RAPD

RESUMO

Os moluscos do gênero Lymnaea são hospedeiros intermediários da Fasciola hepatica agente etiológico da fasciolose,parasitose de importância médica e veterinária.No Brasil já foram reportadas as espécies L. columella,L.viatrix,L.rupestris,L.cubensis.A identificação morfológica desses moluscos é feita com base na comparação dos caracteres da concha,aparelho genital e sistema renal.Entretanto,...de dissecação e a observação dos caracteres diagnósticos. Com o objetivo de contornar esses problemas,foi avaliada a técnica PCR-RFLP(reação em cadeia da polimerase e análise de polimorfismos de tamanho de fragmentos de restrição)direcionada para as regiões ITS2(espaçadora transcrita interna 2 do gene codificador do RNA ribossomal)e 16S(gene RNA ribossomal mitocondrial)como ferramenta auxiliar na identificação dos limneídeos. Foram utilizadas as espécies:L.columella(Brasil, Guadalupe e Venezuela),L.viatrix(Brasil e Uruguai)L. diaphana(Argentina),L.cubensis(Martinique,Cuba e Guadalupe)e L.truncatula(França).A técnica da PCR-RFLP direcionada para a região ITS2 com a enzima HaeIII foi a que gerou resultados mais satisfatórios,permitindo diferenciar os perfis de todas as espécies.A PCR-RFLP mostrou-se uma importante ferramenta taxonômica confirmando a sistemática morfológica clássica de L. columella e L.diaphana.Devido à semelhança morfológica e proximidade genética entre L.viatrix,L.cubensis e L. truncatula,propomos um agrupamento dessas espécies em um complexo denominado complexo Lymnaea truncatula. Utilizando essa técnica,foi possível observar que as populações Lymanea de Rio Acima(MG,Brasil) e de Belo Horizonte(MG,Brasil)apresentaram perfis espécie específicos correspondentes,respectivamente,a L. truncatula e L.cubensis.Este achado representa o primeiro encontro de L.truncatula no Brasil e de L.cubensis em Minas Gerais.Para avaliar a variabilidade genética de L. columella,foi utilizada a técnica RAPD.Neste estudo utilizamos somente L.columella devido a sua grande importância como hospedeira da F.hepatica no Brasil, responsável pela maioria dos focos da fasciolose no país. A análise de variância molecular(AMOVA)e de similaridade pelo coeficiente de Dice foram os métodos utilizados para estimar a estrutura genética de L.columella.Concluímos que essa espécie caracteriza-se por uma heterogeneidade inter-populacional e uma homogeneidade intra-populacional,relacionadas,provavelmente,com o mecanismo reprodutivo(auto-fecundação),ampla distribuição e dinâmica populacional.